目的:建立临床病原真菌的实时荧光PCR检测方法,评价其检测临床标本真菌感染的应用价值。方法:酚-异硫酸氰胍法提取5例临床培养阳性病原真菌的DNA,利用与真菌核糖体的18SrDNA互补的一对通用引物,优化实验条件,建立SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测病原真菌的方法,应用建立的提取真菌DNA和实时荧光PCR方法检测了37例临床标本,通过对比传统鉴定方法,评价其检出真菌感染的有效性。结果:通过酚-异硫酸氰胍法提取的病原真菌DNA在纯度和质量上都符合PCR的实验要求,且整个提取过程经优化后在1小时内完成;建立的实时荧光PCR方法扩增曲线形态良好,无非特异性扩增,标准曲线相关系数达到1.0,检测灵敏度达到20pg DNA,5例临床培养阳性真菌菌株均能被检出,且念珠菌和丝状真菌具有不同的Tm值,据此可以初步鉴别。37例临床标本直接镜检共有9例阳性,均为角膜标本,普通培养法共培养到12例阳性,包括镜检阳性的9例角膜标本,其余3例为深部真菌病患者组织,实时荧光PCR法检测阳性12例,与培养法检测结果完全一致,无一例假阳性。结论:采用的酚-异硫酸氰胍法提取病原真菌DNA简便快捷,成本低廉,效果良好,适合临床实验室常规使用。建立的实时荧光PCR方法能特异、灵敏的检测临床病原真菌,为临床真菌感染的诊断提供了一种快速、准确的方法。