硼对大鼠睾丸Sertoli Cell及种公猪精液品质的影响

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本文研究硼对大鼠睾丸Sertoli Cell及种公猪精液品质的影响。试验首先选用18-22日龄雄性SD大鼠,分离Sertoli Cell,经过免疫荧光进行细胞鉴定,通过HE染色、细胞活性试验、流式细胞术研究不同浓度硼对Sertoli Cell形态、活性、增殖与调亡的影响,试验分为对照组、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、40.0、80.0 mmoL/L 8个梯度硼试验组。进而研究雌激素阻断剂特异性阻断雌激素受体,探究硼是否通过ER来影响Sertoli Cell的增殖、凋亡及相关蛋白、基因的表达量,以及Sertoli Cell分泌的细胞因子含量,主要采用流式细胞术、Western Blot、荧光定量PCR、Elisa等方法检测相关指标。然后试验再选用30头健康性成熟的种公猪,随机分为3组,每组10个重复,试验组分别给其饮水中添加5 mg/L和10 mg/L硼浓度,对照组常规饲料饲喂,饲喂30 d后进行采集精液和采血,观察并检测不同硼水平下猪精液品质的影响及血清中激素水平含量。试验结果如下:1、硼对Sertoli Cell凋亡、增殖的影响通过改进Sertoli Cell的分离、培养方法,采用免疫荧光方法对Sertoli Cell进行鉴定,结果显示,所分离培养的细胞为Sertoli Cell,经显微镜下计数其纯度达95%以上。此方法简便了分离培养Sertoli Cell的步骤,同时提高了 Sertoli Cell的纯度和细胞数量。硼对Sertoli Cell凋亡、增殖的影响,与对照组相比,硼处理浓度低于5.0 mmol/L,可促进Sertoli Cell增殖并抑制其凋亡,增加细胞周期的S、G2/M增殖期细胞比例,硼处理浓度高于5 mmol/L,对Sertoli Cell有明显毒性作用,细胞凋亡率升高,细胞周期的增殖被完全阻滞在G0/G1期,细胞周期中增殖期的细胞比例明显减少。2、硼对ER阻断前后Sertoli Cell凋亡、增殖的影响试验组分为空白对照组、0.5、40 mmol/L硼处理组和加ER阻断剂的对照组、加ER阻断剂的0.5 mmol/L和加ER阻断剂的40 mmol/L硼处理组。分别采用流式细胞仪、Western Blot、荧光定量PCR方法检测。结果显示,硼对ER阻断前后Sertoli Cell凋亡、增殖的影响,进一步证实了低浓度硼(0.5 mmol/L)有利于减少Sertoli Cell的凋亡,提高Sertoli Cell的增殖,高浓度硼(40 mmol/L)促进Sertoli Cell的凋亡;硼对添加MPP阻断剂的Sertoli Cell凋亡有一定的影响,在一定程度上阻断了硼对ERα通路上Sertoli Cell凋亡作用,但对细胞的增殖作用不显著;硼对添加PHTPP阻断剂处理的Sertoli Cell凋亡、增殖有显著性作用,硼可能通过ERβ通路对Sertoli Cell的凋亡、增殖起到调控作用;硼对添加G15阻断剂的Sertoli Cell的增殖有一定的影响,但是对GPR30通路上的凋亡、增殖基因和蛋白并没有完全阻断,硼可能通过GPR30通路调节Sertoli Cell增殖、凋亡,尤其是对Sertoli Cell的增殖。3、硼对ER阻断前后Sertoli Cell细胞因子的影响与空白对照组相比,低浓度硼(0.5 mmol/L)有利于提高Sertoli Cell细胞因子的含量,高浓度硼(40 mmol/L)可以显著降低Sertoli Cell的细胞因子的表达量。硼对ER阻断后Sertoli Cell细胞因子的影响结果是,硼对加了 PHTPP和G15阻断剂的ERβ和GPR30通路的Sertoli Cell细胞因子有一定的影响,分别对Sertoli Cell中与生殖相关的ABP、ER、TRF细胞因子的表达量有显著的调控作用。4、硼对种公猪精液品质的影响添加0.08和0.16 mmoL/L的硼可以显著增加种公猪精子活力,有效精子数和精子密度,在一定程度上提高了种公猪A、B级精液的水平;也提高了种公猪血清促黄体素(LH)含量,分别显著提高了 53.82%、330.83%,其中0.16 mmoL/L可以显著提高睾酮(T)含量,提高了 207.62%(P<0.05)。
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