姜黄中活性成分的提取及系统分析研究

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姜黄为姜科姜黄属的多年生草本植物,含有多种化学成分,具有良好的药用价值和经济前景。国内外科研人员对姜黄中化学活性成分分析、纯化及药理性等方面的研究已有报道,但对姜黄中重要的成分之一——黄酮类物质的研究还未见报道,且对姜黄中活性成分的系统研究也鲜见报道。本论文采用分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法和气质联用法等现代分析检测手段,对姜黄中的主要成分黄酮类化合物、姜黄素类物质及姜黄油做了系统的分析研究,为进一步有效开发利用姜黄药材提供了重要参考。本论文重点研究了以下几方面内容:1.比较研究了不同提取方法对姜黄中黄酮得率的影响。重点研究了溶剂回流提取法、超声提取法和索氏提取法等三种不同方法提取姜黄中的总黄酮,通过单因素实验及正交实验优化条件,确定了总黄酮最高得率对应的最佳提取方法和最佳提取条件。三种方法对比发现溶剂回流提取法所得总黄酮得率最高(1.54%)。2.姜黄中总黄酮的分析。采用铝盐显色分光光度法测定姜黄中总黄酮的含量,在波长508nm条件下,以亚硝酸钠一硝酸铝为显色剂,常温显色,15min后,分光光度计进行测定。标准溶液在4μg/mL~40μg/mL内呈良好的线性关系,线性回归方程为y=11.751x+0.0024,相关系数R2=0.9999;测得姜黄中总黄酮含量的RSD=1.84%,说明方法的精密度良好;加标回收率在97.10%-103.75%范围,平均为99.45%,说明该方法用于姜黄中总黄酮含量的测定,结果准确、可靠。3.姜黄中总姜黄素的分析研究。采用紫外-可见分光光度法和HPLC法分析姜黄素类化合物,对这两种现代仪器分析方法进行了综合比较,并通过流动相种类、流动相比例及离子调节剂含量的改变,探讨并确定了姜黄素类化合物分离检测的最佳色谱条件,发现HPLC法的精密度好、加标回收率高。结果显示,分离姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素三种化合物的最佳色谱条件为:色谱柱:Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm);柱温:35℃;流动相:乙腈:水(1.0%冰醋酸)=55:45,流速:1.0mL/min;检测波长:424nm;进样量:10μL,在此条件下测定超声、回流和索氏三种不同提取方法所得总姜黄素得率分别为:3.02%、2.74%、1.69%,四种不同溶剂甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取所得总姜黄素的得率分别为:2.97%、2.44%、1.89%、1.67%。结果表明,HPLC法不仅可以将姜黄素中三种目标成分很好的分离,而且还可以通过外标法进一步分别计算三种目标物的得率及姜黄素类化合物的总得率。4.姜黄油的成分鉴定。采用气相色谱法优化了不同提取方法及不同溶剂提取姜黄所得挥发油的色谱条件,确定了姜黄油分离效果最佳的色谱条件为:FID检测器温度:280℃;进样口温度:260℃;分流比:30:1;进样体积:1.0μL;载气,N2流速:1mL/min;程序升温:80℃—10℃/min→180℃——4℃/—min→260℃。进一步采用气质联用法对姜黄油化学成分进行分离和鉴定。鉴定结果显示,含量最高的8种成分三种不同提取方法——超声、回流和索氏提取的相对含量分别为:α-姜黄烯(6.69%、6.43%、5.96%)、α-香柠檬烯(5.06%、4.52%、4.92%)、p-没药烯(2.23%、2.02%、0.89%)、p-倍半水芹烯(8.03%、7.87%、7.74%)、芳姜黄酮(12.45%、12.12%、11.73%)、姜黄酮(7.94%、7.62%、6.34%)、吉玛酮(8.36%、0.00%、8.15%)、莪术二酮(12.55%、12.20%、11.69%);三种不同溶剂——丙酮、正己烷和石油醚提取所得姜黄油中含量最高的8种化合物的相对含量分别为:α-姜黄烯(6.71%、6.43%、6.09%)、α-香柠檬烯(4.88%、4.52%、4.88%)、β-没药烯(1.89%、2.04%、2.02%)、β-倍半水芹烯(6.86%、7.87%、6.38%)、芳姜黄酮(10.85%、12.12%、10.72%)、姜黄酮(6.67%、7.62%、6.41%)、吉玛酮(6.97%、0.00%、6.72%)、莪术二酮(11.35%、12.20%、11.95%)。
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