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背景：斯氏狸殖吸虫[Pagumogonimus skrjabini (Chen,1959) Chen,1963]散在分布于我国四川、重庆、甘肃、福建等15个省、市、自治区，国外尚没有该虫种分布的报道。由于人为该寄生虫的非正常宿主，幼虫在人体内通常不能发育至成虫，而是滞留于童虫阶段。由于童虫在人体内组织、器官间的游走、移行，造成肺外不同组织、器官的损害，常常引起游走性皮下包块或结节、脑占位性病变和内脏损伤等不同类型肺外型肺吸虫病表现。根据其寄生部位的不同，临床表现多种多样，临床症状常常不典型，因而误诊率甚高, 给人们的健康，尤其是儿童的健康造成极大的危害，阻碍了流行区的经济建设。该虫体在人体内寄生的特点决定了其病原学诊断困难，因而免疫学检查在该型肺吸虫病的实验室诊断和鉴别诊断中尤其重要。在常用的抗原、抗体检测系统中，影响检测效果的关键因素主要是诊断用抗原和免疫诊断方法。要求诊断用抗原具有较高的特异性，同时要求免疫诊断方法既要有高度的敏感性和特异性，又要操作简便、快速，才能满足临床常规免疫诊断的需要。
目的： 1.研究斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原（Excretory-secretory antigen，ES-Ag），检测和分析其特异抗原组分；为开发敏感、特异的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供参考资料。 2.建立斑点金免疫渗滤法（dot immunogold filtration assay，DIGFA）检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体,以快速诊断肺吸虫病，并明确DIGFA的敏感性、特异性、重复性和稳定性。
方法： 1.用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、酶联免疫电转移印迹(Western blotting)和二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis)等方法,对斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原及成虫ES抗原进行分析。 2. 以斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原为上样抗原，胶体金标记羊抗人IgG为显色剂，建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法（DIGFA）；并以经典的ELISA方法作平行对照。
结果： 1. 斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原及成虫ES抗原经SDS-PAGE，氨银染色和考马斯亮兰染色后，都可见1复杂的蛋白带谱。氨银染色后，成虫可溶性抗原显示30条以上蛋白带，主带18条，染色深而宽，分子量范围为13.0～68.6 kDa间；成虫ES抗原可见9条蛋白带，主带4条，分子量范围为13.0～38.4 kDa间。考马斯亮兰染色后，成虫可溶性抗原可见22条蛋白带,分子量范围为13～64kDa，其中主带8条,即13、15、22、26、28、35、40和64kDa，而65kDa以上未见条带；成虫ES抗原可见6条蛋白带，分子量范围为13.0～30.1kDa，主带3条，分别为13、26和28kDa。成虫可溶性抗原及其ES抗原经SDS-PAGE电泳后，在10～30 kDa间蛋白区带的位置、宽度及染色深浅度较相似，其相似的主带有13、26和28 kDa蛋白带；而在40～100 kDa间蛋白带其位置差异较大，各带均不同。 2. Western blotting成虫可溶性抗原显示20条显色带, 主带6条，即13、18、22、28、35和64kDa。但在15、26和40kDa处缺如，值得注意的是SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色不清楚的一些蛋白带经酶联免疫印迹染色后变得清晰可见,如18kDa蛋白带。可见有些成虫可溶性抗原量虽少,却可产生明显的免疫反应。而SDS-PAGE考马斯亮蓝染色清楚的一些蛋白带经酶联免疫染色后却未见棕色条带,如15、26、40kDa蛋白带。特别是26kDa在SDS-PAGE凝胶虽为主带，染色特别宽深，而在Western blotting却无反应；成虫ES抗原显示3条显色带,主带2条，即13和28kDa。 3. 二维电泳分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点, 绝大部分分布于PI 3.10～7.14，少数分布于PI 8.78～9.85，而在PI 7.14～8.78之间，几乎未出现多肽斑点；其分子量范围为14～70kDa。48个多肽斑点中18个着色深，为主要抗原多肽点，其中酸性多肽斑点11个，中性多肽斑点2个，碱性多肽斑点5个。4. DIGFA和ELISA分别检测83例斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体，其阳性率分别为95.2％和91.6％，两法差异无显著性(P＞0.05)。DIGFA分别检测健康者血清32例、华支睾吸虫病患者血清23例和日本血吸虫病患者血清36例，前者均为阴性，后两者的交叉反应率分别为4.3 ％和8.3 ％；DIGFA和ELISA两法的符合率达92.3 ％。
结论： 1. 斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色后显示的22条蛋白带中,有6条蛋白含量较高、免疫印迹识别可见的显色条带；成虫ES抗原6条蛋白带中,有2条蛋白含量较高、免疫印迹识别可见的显色条带。这些具有较强免疫反应性的蛋白的存在,对进一步研究斯氏狸殖吸虫有较大价值。然而这些抗原是否都是斯氏狸殖吸虫的特异抗原,还需与其它吸虫的免疫血清进行Western blotting, 以进一步确定其特异性。2.在斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点中有18个多肽含量明显较高,其中大部分为小分子量、偏酸性的多肽斑点。 3. 我们建立的DIGFA，其敏感性和特异性与ELISA相近，但方法简便、快速、试剂稳定，且不需特殊设备，适用于各级医疗单位和血清流行病学调查，是一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体的较好的免疫诊断方法。