论文部分内容阅读
目的:研究RNPC1在肾癌中的表达及其对肾癌细胞生物学功能的影响,以探索RNPC1的表达与肾癌发生发展之间的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot,WB)检测RNPC1 mRNA及其蛋白在肾癌组织和细胞中的表达情况。运用慢病毒转染技术,建立稳定RNPC1过表达和干扰的细胞系,然后通过WB和qRT-PCR方法确认转染效率。通过CCK-8细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell迁移侵袭实验、流式细胞周期检测等实验,研究RNPC1对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。进一步通过裸鼠皮下成瘤实验检测RNPC1肿瘤功能调控。WB方法检测RNPC1对信号通路蛋白表达水平的影响,探讨RNPC1对肾癌细胞生物学功能影响的可能分子机制。最后,我们用140例患者组织芯片进行免疫组化,检测RNPC1表达情况,并且结合患者预后情况进行生存分析。结果:qRT-PCR和WB结果显示RNPC1在肾癌肿瘤组织与癌旁正常组织相比低表达(p<0.05)。细胞功能学实验表明过表达RNPC1与对照组相比,能够抑制肾癌细胞的增殖能力、克隆形成、迁移和侵袭能力,WB结果显示过表达RNPC1后E-cadherin的蛋白表达增加和β-catenin及vimentin的蛋白表达下降,提示过表达RNPC 1可能抑制EMT通路,从而抑制肾癌细胞的迁移侵袭能力。并且,RNPC1敲低后,细胞周期中G0/G1期比例显著降低,而相应的S期和G2/M期的比例显著增高;相反RNPC1过表达后,细胞周期中G0/G1期比例显著增高,而相应的S期和G2/M期的比例显著降低。裸鼠成瘤结果显示,RNPC1过表达组小鼠形成肿瘤较对照组更晚更小。免疫组化分析结果显示140例患者中,RNPC1表达水平与病人年龄(P=0.004)和是否患有糖尿病(P=0.002)可能有关。然而,RNPC1的表达水平与其他变量无关,如肿瘤大小(P=0.466),性别(P=0.939),或者肿瘤分期(P=0.462)和分级(P=0.793)。RNPC1阳性表达的肾癌患者预后更好,且单变量分析显示,肾癌患者的预后明显与病理分期(P=0.002),肿瘤分级(P=0.006)和RNPC1表达(P=0.006)有关。最后,多因素分析显示,病理分期(P=0.004),肿瘤分级(P=0.014)和RNPC1表达(P=0.023)是肾癌患者预后的独立预测因素。结论:结果表明,RNPC1的表达对肾癌患者生存预后存在一定影响,在肾癌细胞中可能作为抑癌基因,对RCC治疗有重要的意义,为临床治疗肾癌提供新的作用靶点。