论文部分内容阅读
本文为研究山羊卵母细胞和孤雌激活胚胎在无血清成熟液和培养液中的成熟、发育情况而做了两个实验:(1)山羊卵母细胞无血清体外成熟培养;(2)山羊孤雌激活胚胎无血清体外培养。实验的目的是为避免血清对卵母细胞和胚胎的副作用和不利影响而建立一种山羊胚胎的无血清体外培养体系。1.在OM成熟液中分别以0.3%牛血清蛋白(BSA)(m/v)、1%聚乙烯醇(PVA)(m/v)和1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠(ITS)(v/v)代替成熟培养液中胎牛血清(FBS),以添加5%FBS的OM为对照组,对来源于屠宰场的卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。成熟率PVA添加组(50.00%),极显著低于FBS组(83.23%)(P<0.01),BSA组(71.19%)和ITS组(76.79%)与FBS组无显著差异(P>0.05);成熟卵母细胞用离子霉素联合6-DMAP激活,在SoFaa中进行孤雌胚培养,BSA、PVA、ITS及FBS各组的卵裂率依次为61.90%、46.97%、79.07%和83.58%,囊胚率分别为25.00%、19.70%、55.81%和60.45%。结果表明:在OM基础培养液中添加BSA或PVA,卵母细胞的成熟率明显低于添加FBS,且卵裂率和囊胚发育率也低于对照组(P<0.05或P<0.01);添加ITS,卵母细胞成熟率虽低于对照组,但孤雌胚卵裂率和囊胚发育率与对照组接近(P>0.05)。2.在SoFaa胚胎培养液中分别添加1% ITS(v/v)、0.6%BSA(m/v)和0.1% PVA(m/v),以0.6%BSA(m/v)+10% FBS(v/v)为对照组,共分为四组对用离子霉素联合6-DMAP孤雌激活的卵母细胞进行体外培养。在加入ITS、BSA、PVA和BSA+FBS组的卵裂率分别为82.27%、75.10%、72.57%和80.29%;囊胚率分别为38.76%、13.81%、7.73%和56.82%。结果表明:在SoFaa中加入ITS组的山羊孤雌激活胚胎第一次卵裂率与加入BSA、PVA和BSA+FBS组的差异不显著(P>0.05);而囊胚率虽然极显著高于BSA和PVA组(P<0.01),但是也极显著低于加入BSA+FBS组(P<0.01)。结论:(1)在本实验条件下,在OM成熟液中添加ITS可以使卵母细胞很好的成熟,表明以ITS代替FBS,可用于山羊卵母细胞体外成熟培养。(2)在胚胎培养液SoFaa中添加ITS得到略高于其它组的卵裂率(P>0.05),所以ITS可代替BSA+FBS用于胚胎第一次卵裂前后的培养;但是由于ITS不能达到FBS对胚胎发育至囊胚的营养支持其它方面的促进作用,所以不能完全代替培养液中血清使胚胎发育至囊胚,因此要想完全替代培养液中的血清可能需要ITS和一些物质联合使用,或寻找其它物质代替血清才能达到有血清存在时的胚胎发育效果。