【摘 要】
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烧伤烫伤是指由物理化学因素导致的组织损伤,是日常生活中较为常见的创伤。在伤口愈合过程中,锌元素具有止血,调节炎症反应,和促进上皮化的功能,以此来加速伤口的愈合;而表皮细胞生长因子（EGF）是一类具有生物活性的多肽,近年来也被用于各类创面的治疗,在伤口修复过程中,EGF也具有促进上皮细胞和成纤维细胞增殖,促进血管生成及调节炎症反应的作用;但在烧伤烫伤的治疗中,将锌元素和EGF联合制备皮肤外用制剂的报
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烧伤烫伤是指由物理化学因素导致的组织损伤,是日常生活中较为常见的创伤。在伤口愈合过程中,锌元素具有止血,调节炎症反应,和促进上皮化的功能,以此来加速伤口的愈合;而表皮细胞生长因子（EGF）是一类具有生物活性的多肽,近年来也被用于各类创面的治疗,在伤口修复过程中,EGF也具有促进上皮细胞和成纤维细胞增殖,促进血管生成及调节炎症反应的作用;但在烧伤烫伤的治疗中,将锌元素和EGF联合制备皮肤外用制剂的报道较少。为了制备一种使用方便,安全有效且具备天然抗菌活性的用于治疗皮肤烫伤的制剂,本文采用较为常用的壳聚糖和泊洛沙姆作为凝胶材料,并添加葡萄糖酸锌和重组人表皮细胞生长因子（r EGF）两种药物,制备一种温敏型水凝胶敷料,通过考察凝胶制备处方、体外质量评价、体外抑菌效果及对细菌生物膜的影响、对烫伤大鼠的治疗效果及刺激性,以期为临床上治疗烧伤烫伤的研究奠定基础。1.通过制备大鼠皮肤二级烫伤模型,使用Image J软件计算皮肤伤口面积,比较不同时间的皮肤伤口收缩率,通过皮肤伤口收缩率来评价各组凝胶对烫伤皮肤的治疗效果,得到温敏凝胶的处方:壳聚糖（CS）浓度2%、泊洛沙姆407（P407）浓度23%和泊洛沙姆188（P188）浓度3%、葡萄糖酸锌浓度0.5%及r EGF 20μg/ml。2.体外质量评价表明,所制备的温敏凝胶质感细腻,浅黄色,常温下为流动的液体状态,体温下为胶凝状态;3000r/min离心30min后未见分层现象,均匀性良好,且在12h内保湿效果良好;经过测定,所制备的温敏凝胶的胶凝时间为1.6min左右,胶凝温度为33℃左右,凝胶p H值在4.5-5.0之间;通过对凝胶的体外溶蚀和r EGF的体外释放实验,发现在6h内凝胶的体外溶蚀率达到95%,r EGF体外释放率达到80%,将r EGF的累计释放率（X）对凝胶的累计溶蚀率（Y）作图,得到回归方程为Y=1.3826X-0.0471（R2=0.9952）,其线性关系良好,表明药物释放与凝胶的溶蚀相关。3.通过直接接触体外抑菌实验发现所制备的温敏凝胶对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均具有抑制作用。通过结晶紫染色法探究所制备温敏凝胶对细菌生物膜的影响,结果发现载葡萄糖酸锌/r EGF壳聚糖温敏凝胶对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌单一菌株和混合菌株的生物膜的形成也具有抑制作用,凝胶与菌液共培养24h,对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制率为89.51%,对绿脓杆菌的抑制率为75.87%,对混合菌株细菌生物膜形成的抑制率为79.12%;此外,凝胶对已经形成的细菌生物膜也具有清除作用,凝胶与已形成生物膜作用24h,对金黄色葡萄球菌生物膜的清除率为59.10%,对绿脓杆菌生物膜的清除率为81.97%,对两株菌株混合生物膜的清除率为94.29%。4.通过烫伤大鼠模型,计算不同治疗时间的皮肤伤口收缩率,使用试剂盒测定不同取样时间烫伤大鼠血清中碱性磷酸酯酶含量（APK）及皮肤组织中羟脯氨酸（HYP）、（白介素-6）IL-6和（转化生长因子-β1）TGF-β1的含量。结果表明,在治疗第21d时,载葡萄糖酸锌、载r EGF、载葡萄糖酸锌/r EGF的三组壳聚糖温敏凝胶的皮肤伤口收缩率均达到93%,而单独的壳聚糖温敏凝胶组（不载药物）和模型组（不做任何处理）的皮肤伤口收缩率为85%左右,表明载药的壳聚糖温敏凝胶对大鼠烫伤的治愈效果较好;载药的3组壳聚糖温敏凝胶可以提高皮肤组织的羟脯氨酸（HYP）含量,促进皮肤创面的愈合;添加葡萄糖酸锌的壳聚糖温敏凝胶可以在一定程度上提高烫伤大鼠血清中碱性磷酸酯酶（APK）的含量,补充创面愈合过程中锌的需求;添加r EGF的壳聚糖温敏凝胶在治疗前期能够降低皮肤组织中IL-6的含量且提高TGF-β1的含量。5.使用雄性新西兰大白兔作为皮肤刺激性实验的实验动物,进行正常皮肤和‘#’损伤皮肤的刺激性实验。结果表明,连续涂抹药物7d后,正常皮肤和‘#’损伤皮肤均与生理盐水对照组表现一致,表明载葡萄糖酸锌/r EGF的壳聚糖温敏凝胶对损伤皮肤和正常皮肤均没有刺激性,使用较安全。本文成功制备了载葡萄糖酸锌/r EGF的壳聚糖温敏凝胶,并对其进行了药效学实验及皮肤刺激性性实验,本文所制备的凝胶体外抑菌性能良好,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌均表现出较有的抑制效果,对烫伤大鼠治疗有效,且对皮肤没有刺激性,为临床上治疗烧伤烫伤制剂的开发提供了一种新思路。
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