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目的以含BMP-2基因的腺病毒感染兔骨髓间充质干细胞诱导其表达成骨细胞表型,再将转染的MSCs与高分子生物材料PLGA支架相复合,在体内构建组织工程化骨,观察该方法的可行性和有效性,以期找到一种较好的修复骨缺损的方法。方法采用密度梯度离心法自骨髓中分离培养兔骨髓间充质干细胞,观察原代及传代MSCs形态特点、生长特性和特殊染色,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。以含BMP-2基因的腺病毒感染MSCs后,以MTT法及流式细胞仪观察转染对细胞增殖活力及细胞周期的影响;用RT-PCR法、免疫组化染色证实转基因MSCs的BMP-2蛋白表达情况;通过ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性;通过放免分析试剂盒检测两组细胞的骨钙素(osteocalcin, OCN)含量。制备孔径为150~300μm,孔隙率为90%的PLGA与腺病毒感染后的兔MSCs共培养,电镜观察了解细胞在PLGA上粘附、生长和合成分泌骨基质成分的情况;并在体内构建组织工程化骨,通过组织学观察了解组织工程化骨形成情况。结果经密度梯度离心法分离贴壁筛选后所得到的细胞,符合骨髓间充质干细胞特征。腺病毒感染后MSCs形态特征、细胞增殖情况及细胞周期无显著变化,实验证实用Ad-BMP-2转染的MSCs具有成骨细胞的结构特征和生物学特性。转染后的MSCs的碱性磷酸酶及骨钙素含量均较未转染组有显著增高,差异均有显著性意义(p<0.05)。制备得到的PLGA为疏松多孔的网格样结构,具有一定的韧性和强度。将腺病毒感染的骨髓间充质干细胞接种于修剪成一定形状的PLGA上,经电镜观察可见细胞贴附于材料表面和孔隙内并增殖。异位成骨实验证实该复合材料可形成新骨组织。结论用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞是可行的。分离获得的骨髓间充质干细胞体外培养显示,以1-5代细胞作为组织工程的种子细胞是适宜的。PLGA是一种良好的骨组织工程的载体材料,有利于种子细胞的粘附生长,并能在体外构建组织工程化骨。