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目的：具有强烈酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白在慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)发生和发展过程中起着关键性的作用。BCR/ABL蛋白激酶特异性抑制剂伊马替尼（Imatinib,IM）对该病有很好的治疗效果，但日益出现的耐药现象影响了其临床应用。课题组前期以Bcr-Abl的Y177磷酸化（Y177-p）为靶点，通过构建重组腺病毒载体Ad5F35-SH2-DED（简称Ad5F35-SD），利用其SH2结构域与Bcr-Abl的Y177-p结合可抑制下游细胞恶性增殖信号、DED结构域能激活Caspase8蛋白从而诱导细胞凋亡的特点，在IM敏感的CML细胞模型和动物体内实验的研究中均证实了其抑增殖和促凋亡效应。本课题拟进一步研究Ad5F35-SD对耐IM的CML细胞株K562/G01的生物学效应的影响，为耐IM的CML患者的治疗提供新思路。方法：1．确定重组腺病毒Ad5F35-SD和Ad5F35-SmD（突变对照）在K562/G01细胞的感染效率、最佳感染时间和MOI值；通过MTT实验、流式细胞术和克隆形成实验，检测重组腺病毒Ad5F35-SD对K562/G01细胞增殖的影响。2．通过瑞氏染色细胞形态学、流式细胞术和Western-blot检测凋亡蛋白caspases8、PARP等细胞凋亡方法，分析重组腺病毒Ad5F35-SD对K562/G01细胞凋亡的影响。用caspases8抑制剂Z-IETD-FMK处理Ad5F35-SD组细胞，初步探讨Ad5F35-SD引起凋亡效应的途径。结果：1．Ad5F35-SD感染K562/G01细胞作用时间在48h、MOI值为105时，感染效率最高，约为60%，为下一步研究该重组腺病毒对K562/G01细胞的生物学效应奠定了基础。2.与对照组相比，Ad5F35-SD组对K562/G01细胞增殖的抑制率为48.12±2.07%（p<0.05）、克隆形成抑制率为41.2%（p<0.05）、G2期的K562/G01细胞为28.94±0.24%（p<0.05），而Ad5F35-SmD组结果与对照组相比均无统计学意义。3．与对照组相比，Ad5F35-SD感染组细胞胞体不规则、胞浆出现空泡、胞核皱缩、核碎裂；流式细胞术显示细胞凋亡率增高13.44±2.30％（p<0.05）；Western-blot显示凋亡蛋白caspases8（89KD）、PARP（43KD）裂解片段。而Ad5F35-SmD组结果与对照组相比均无统计学意义。用caspases8抑制剂Z-IETD-FMK处理Ad5F35-SD感染组后，其细胞凋亡率减至1.08±0.76％（p﹥0.05），caspases8、PARP蛋白均未出现裂解片段。结论：本实验证实重组腺病毒Ad5F35-SD有抑制K562/G01细胞增殖和促凋亡的作用。Ad5F35-SD诱导K562/G01细胞凋亡的作用是通过激活caspases8途径实现的。研究结果为CML的治疗，特别是对IM耐药的病例提供了新的靶点。