论文部分内容阅读
目的:吉非替尼(Gefitinib,ZD1839,商品名IRESSA)是一种具有口服活性、可逆的小分子表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI),临床前及临床试验证明对多种实体瘤都有效,但临床上观察到有些有效的病例在经过一定的缓解期后疾病进展,考虑产生了获得性耐药。为了探讨吉非替尼治疗中发生获得性耐药的机制,建立了人结肠癌吉非替尼耐药细胞系LOVO/Gefitinib,并对其生物学特性进行了研究,并初步探讨了P-糖蛋白(P-gp)和血管内皮生长因子(VEGF)与耐药的关系。方法:人结肠癌细胞系LOVO为诱导对象,采用在培养液中逐步增加吉非替尼浓度的方法,建立了人结肠癌耐药细胞系LOVO/Gefitinib。细胞记数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测LOVO/Gefitinib的耐药指数(RI)及对氟尿嘧啶(5-Fu),顺铂(DDP),奥沙利铂(L-OHP),伊立替康(CPT-11)的交叉耐药谱。用免疫细胞化学的方法检测细胞P-gp的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测无血清培养48h后细胞上清中VEGF的含量。结果:建立了人结肠癌吉非替尼耐药细胞系LOVO/Gefitinib,其对亲代细胞的耐药倍数为14.13。根据生长曲线计算出了LOVO和LOVO/Gefitinib细胞的倍增时间分别为37.7h和31.3h,耐药细胞系比亲代细胞系增殖增快。细胞周期分布结果,LOVO细胞G0-GI期65.3%,S期33.5%,G2-M期1.2%,LOVO/Gefitinib细胞G0-GI期48.9%,S期49.2%,G2-M期2.8%,耐药细胞S+G2-M期细胞明显高于其亲代细胞,即处于增殖期的细胞明显增多。LOVO/Gefitinib对5-Fu,DDP,L-OHP,CPT-11的耐药倍数分别为7.00,3.83,1.79和2.05,均产生