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骨唾液酸蛋白（Bone Sialoprotein，BSP）是一种主要由成骨细胞和破骨细胞分泌的硫酸化、磷酸化和高度糖基化的非胶原蛋白，其组织分布相对局限，主要分布在矿化组织（如骨、牙齿）和钙化的软骨和骨的交界区，在非骨组织中存在的唯一部位是人胎盘滋养层和血小板。BSP具有RGD序列和聚谷氨酸序列等特殊结构，具有多种生物学功能。BSP参与组织矿化，并与多种骨代谢疾病、血管生成和肿瘤骨转移有关。检测BSP在肿瘤组织中的表达情况，可以预测肿瘤骨转移的可能性。血清BSP水平可以作为骨质疏松症等骨代谢疾病诊断指标。
BSP免疫检测试剂盒是研究BSP很有力的工具。由于检测BSP的进口ELISA试剂盒价格昂贵，限制了其应用。2003年本实验室利用毕赤酵母发酵得到rhBSP，2005年利用杂交瘤技术制备出BSP单克隆抗体。本课题利用BSP mAb包板，兔抗BSP多抗检测建立双抗夹心ELISA检测BSP的系统，为进一步研究BSP免疫检测试剂盒奠定方法学基础。
主要研究结果如下：
1．毕赤酵母表达系统表达的rhBSP经固定化金属离子亲和层析（IMAC）纯化，可获得纯度达98％的rhBSP蛋白；rhBSP蛋白分子量约为75KDa，浓度为769．75μg/ml，蛋白回收率为73％。
2．AHB6杂交瘤细胞株接种到Balb/c小鼠腹腔内可获得含BSP mAb的杂交瘤腹水；采用Protein-A亲和层析柱纯化腹水单抗，获得BSP mAb。BSP mAb重链分子量约为50kDa，轻链约为27kDa，浓度为1044μg/ml，效价为1×10-7。
3．自建双抗夹心ELISA法BSP mAb最佳包被浓度为1．0μg/ml，兔抗人BSP抗体的最佳稀释度为1：1000；线性范围为2-100ng/ml，线性方程y=0．1508x+0．1211（r=0．9989），灵敏度为1．5ng/ml；4℃下有效期为315天；批内变异系数为3．2％-8．2％；批间变异系数为6．1％-12．3％。回收率在84．9％～86．2％之间；具有良好的特异性和重复性。