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目的寻找ER/PR(+)乳腺癌MCF-7耐他莫昔芬(TAM)细胞株相关的抑癌基因Cp G岛启动子甲基化异常状态,筛选出能够预测MCF-7对他莫昔芬敏感性相关的关键基因,为抑癌基因启动子区域异常甲基化作为预测临床内分泌治疗敏感性方法提供理论依据。方法1.用噻唑蓝比色法(MTT)法对比检测MCF-7/TAM耐药倍数及乳腺癌MCF-7细胞株与耐药株MCF-7/TAM生长增殖差异。2.流式细胞术(FCM)对比两细胞株生长周期及凋亡率之间差异。3.RT-PCR和real-time PCR检测亲本与耐药细胞株MCF-7/TAM相关基因(DAPK、RASSF1A、MGMT、P53、DNMT1、DNM3B、DNMT3A)的m RNA表达差异。4.MS-PCR检验候选基因(DAPK、MGMT、P53、RASSF1A)在MCF-7及MCF-7/TAM中的启动子甲基化水平。结果1.MTT显示:48h MCF/TAM的IC50值为(17.92±0.03)μmol/L,耐药倍数为2.63(t=51.20,P<0.05)MCF/TAM细胞株增殖水平较高(t=4.472,P<0.001)。2.流式分析:MCF-7较MCF-7/TAM细胞株Gl期的部分阻滞,生长抑制,凋亡率较高。3.real-time PCR显示:MCF-7/TAM细胞株中基因DAPK(Z=-2.087,P<0.05)、RASSF1A(Z=-4.123,P<0.001)m RNA表达水平低于亲本MCF-7细胞株;而基因P53(Z=10.378,P<0.001)、MGMT(Z=42.378,P<0.001)、DNMT1(Z=19.378,P<0.001)、DNM3B(Z=9.378,P<0.001)的mRNA表达水平高于MCF-7细胞株;基因DNMT3A的mRNA表达水平过低,在耐药株与亲本细胞株中均未能检出。4..MSP显示,在MCF-7/TAM细胞株中,基因DAPK、P53、RASSF1A启动子为甲基化状态;而亲本细胞株中基因DAPK、P53、RASSF1A启动子为非甲基化状态;MCF-7/TAM细胞株中MGMT去甲基化水平增高,结合real-time PCR各基因m RNA表达水平检测,可见,各基因表达水平与其启动子甲基化状态呈负相关性,基因P53表达水平与甲基化状态不一致,可能还受其他因素调控。结论1.乳腺癌MCF-7/TAM细胞株存在多种基因启动子甲基化现象。2.在乳腺癌MCF-7/TAM细胞株中,基因MGMT去甲基化水平降低,表达水平显著升高,可作为预测内分泌治疗耐受性的敏感基因。3.在乳腺癌MCF-7/TAM细胞株中,基因DNMT1、DNMT3B表达量明显升高,将为运用表观遗传学逆转药物耐受性研究提供新的思路。