论文部分内容阅读
目的：这项研究的目的是通过检测重庆地区人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)阴性、免疫力低下患者痰液中的肺孢子（Pneumocystis carinii, PC）来探讨该类患者PC的感染率；通过比较不同检测方法对PC的检测效率，从而探讨实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR, r-PCR）在临床上对HIV阴性免疫力低下患者合并肺孢子肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia, PCP)的诊断价值；通过对PC内转录间隔区(Internal transcribed spacer, ITS)基因进行序列分析来对重庆地区PC的基因多态性进行初步分析。方法：收集重庆地区71例HIV阴性免疫力低下患者的痰液标本，其中结缔组织疾病患者23例，肿瘤放化疗患者21例，血液系统疾病患者15例，肝移植术后患者7例，肾移植术后患者5例。以ITS基因为目的基因，分别运用六亚甲基四胺银（Gomort methenamine silver stain,GMS)染色法、巢式PCR法和r-PCR法检测标本中的PC，将两种PCR法检测均为阳性的标本的PCR产物送予基因序列测定，然后进行PCITS基因多态性分析。结果：（1）71名患者中，痰液标本经GMS染色后，仅有2例结果为阳性，经巢式PCR检测后，25例结果为阳性，巢式PCR的检出率显著高于GMS染色法；PC感染率为35.21%，其中肿瘤放化疗后患者、血液系统疾病患者、肾移植患者、肝移植患者、结缔组织疾病患者感染率分别为33.33%、26.67%、40.00%、42.86%、39.13%，各病例组间感染率差异无显著性，但本组病例PC感染率显著高于同期国外报道，感染率同2009年国内报道值接近。（2）根据临床PCP诊断结果，巢式PCR假阳性率较高为36.00%，其特异度为83.01%，灵敏度为88.89%，阳性预测值为64.00%，当用103copes/ml为判断r-PCR结果阴阳性的阈值时，r-PCR的灵敏度（83.33%）同巢式PCR无显著差异性，但它的特异度（98.11%）和阳性预测值（93.75%）均显著高于巢式PCR；临床诊断PCP患者中r-PCR检测出PC的基因载量显著高于非临床诊断PCP患者。（3）通过对15例阳性标本的PCR反应物进行测序，获得15条ITS序列，其中ITS1共获得了4个基因型（B,M,E,K）和11条新序列，获得了ITS2的3个基因型（g,i,b）和12条新序列，5.8SrRNA得到了7条新序列，经过组合，得到了1个已知的ITS基因型（Bi）和14个新组合序列，而所有新序列与国外报道的原型比较，存在6~21个碱基差异，差异主要表现为碱基缺失和碱基替换。结论：重庆地区HIV阴性免疫力低下患者群PC感染率较高，临床医师应增强对该类患者是否合并PC感染的警觉性；在HIV阴性免疫力低下患者中，使用痰液为标本时，r-PCR比巢式PCR更有助于准确而快速地诊断PCP，并且可以区分PC定植与感染从而指导临床诊治；重庆区域中，PC-ITS基因具有基因多态性，且可能有新的基因分型。