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第一部分STAT1在乳腺癌中的生物信息学分析以及预后分析目的:探讨在TCGA的乳腺癌病人中的STAT家族的诊断意义以及预后的意义。材料与方法:我们的数据来源于癌症基因组数据库TCGA,临床数据的收集来自于UCSC数据库。通过DAVID对STAT家族的每个成员进行了GO以及KEGG分析,分析基因间的蛋白和基因的相互作用。使用DESeq数据包分析差异表达的基因。病人的分组依据每个STAT基因的表达量的75%为界。生存函数应用多因素COX回归分析。使用皮尔森相关分析,取与STAT1基因相关的基因,进行通路富集分析。结果:生物信息学分析显示STAT家族的分子功能与基因的转录的活动有关,这个家族富集的通路与肿瘤的生长有关。此外,STAT家族在基因以及蛋白层面相关。STAT1、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B以及STAT6在乳腺癌的癌与癌旁中差异表达(p<0.05),对上述基因的无复发生存率以及总生存率进行多因素回归分析校正,发现:STAT1与乳腺癌的无复发生存率相关(p=0.048),与乳腺癌的总生存率无关(p=0.318)。我们取皮尔森相关系数>0.05的基因进行DAVID分析发现富集的通路有:细胞粘附分子(CAMs)、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和趋化因子信号通路。结论:我们发现STAT家族中STAT1、STAT3、STAT4、STAT5A/5B以及STAT6在乳腺癌的癌和癌旁中差异表达。而STAT1以及STAT2在乳腺癌的预后中存在潜在的预后价值。多因素回归分析以及列线图显示STAT1的高表达的患者的预后效果更好,STAT1与其相关的基因富集于免疫以及细胞因子-细胞因子受体相互作用和趋化因子信号通路。进一步的研究有待于后期实验验证。第二部分乳腺癌患者癌组织中STAT1的表达及其临床意义目的:探讨STAT1在乳腺癌及癌旁组织中的表达,分析乳腺癌患者STAT1的表达与临床病理的关系。材料与方法:研究收集2017年1月至2018年6月在广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科住院治疗乳腺癌32例,对癌症以及癌旁组织采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫标记(WB)和免疫组化(IHC)检测STAT1在乳腺癌及癌旁组织中的表达,并研究临床因素患者STAT1的表达的影响。结果:STAT1 m RNA在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);WB及IHC显示乳腺癌组织中STAT1蛋白的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。Ki-67阳性、ER阴性患者的STAT1 m RNA相对表达水平分别低于Ki-67阴性者、ER阳性者(P<0.05)。此外,STAT1m RNA的表达在不同年龄、肿瘤大小以及民族、体质指数(BMI)以及淋巴结转移、病理分级等乳腺癌患者中均无显著差异(P>0.05)。结论:STAT1是乳腺癌的重要分子标志物,它在乳腺癌的发生发展的分子机制中起重要作用,同时对预后的指导判断起重要的指导意义。第三部分Si-STAT1对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231影响的体外实验目的:探讨沉默STAT1对三阴性MDA-MB-231乳腺癌的增殖、细胞周期和凋亡的影响。材料与方法:用四种STAT1沉默基因以及对照的质粒转染入293细胞,通过慢病毒感染MDA-MB-231细胞72-96h后,使用嘌呤霉素进行筛选后继续培养,经过荧光显微镜观察待满屏荧光达80%-90%,使用Western Blot技术检测,挑选细胞株中四种沉默效果最好的质粒。通过CCK8细胞增殖技术检测细胞增殖率,通过流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率的变化。结果:Western Blot技术检测稳定转染的细胞株MDA-MB-231,发现sh-STAT1-33质粒沉默效果最好,沉默率达75%。以沉默效果最好的细胞株进行后续试验,细胞增殖实验结果显示:在12,24,36,48小时可见,沉默细胞株与沉默对照细胞株的OD(450nm)值均有明显的统计学差异(p<0.01)。STAT1沉默细胞株与未干预的细胞株的增殖率在12及36小时存在显著的统计学差异(p<0.01)。流式检测凋亡率显示:沉默组的凋亡率是4.07%±0.65%,正常组的凋亡率是10.93%±3.10%,阴性对照的凋亡率是9.98%±3.48%,与正常组以及阴性对照组相比,沉默组的凋亡率有所降低。结果显示有统计学差异(p<0.05),说明沉默STAT1基因抑制了三阴性乳腺癌细胞株的凋亡。周期结果显示:在三阴性乳腺癌231细胞株中可见,STAT1沉默稳转细胞株较正常组以及沉默阴性对照组细胞G2期含量百分比差异均无统计学意义(p>0.05)。说明沉默STAT1没有和三阴性乳腺癌细胞的周期相关。结论:体外实验显示:在三阴性乳腺癌MDA-MB-231中,沉默STAT1后,细胞增殖率加快以及凋亡受到抑制,与细胞的周期无关。因此STAT1可能成为三阴性乳腺癌的潜在治疗靶点。