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目的本研究将携带胚胎特异性转录因子Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒颗粒感染人包皮成纤维细胞(human postnatal foreskin fibroblasts hPFF),体外重编程为诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell iPSC);原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVE)体系,将表达microRNA-302-367基因慢病毒颗粒感染HUVE,探讨目的基因microRNA-302-367过表达慢病毒颗粒感染HUVE体外重编程为诱导性多能干细胞(inducedpluripotent stem cell iPSC)的关键技术。方法(1)以最佳病毒感染复数(Multiplicity of infection,MOI值)感染hPFF,体外重编程为iPSC,通过细胞形态学、碱性磷酸酶染色进行验证及畸胎瘤成瘤实验对iPSC多向分化潜能进行鉴定(2)采用0.1%Ⅰ型胶原酶灌注人脐静脉,消化15min后收集人脐静脉内皮细胞悬液,接种于T25cm的培养瓶中,进行培养。以免疫细胞化学法进行细胞鉴定;MTS法测定细胞生长曲线。(3)将过表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的空病毒颗粒感染HUVE,在荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况,探讨最佳感染条件及MOI值;(4)将生长状态良好的HUVE随机分为3组:正常对照组、含绿色荧光蛋白空病毒载体感染组、目的基因感染组进行感染,第2天给予干细胞培养条件,在倒置显微镜下动态观察细胞形态变化,探讨最佳培养条件。结果(1)在最佳MOI值40的慢病毒感染条件下感染hPFF,感染7天后,细胞伪足收缩,形态由长梭形变为圆形,感染25天后,可挑选细胞克隆;碱性磷酸酶染色为阳性;畸胎瘤成瘤实验证实iPSC具有向内、中、外三个胚层分化的潜能(2)0.1%Ⅰ型胶原酶消化人脐静脉体外建立稳定的HUVE系,培养3天后,0.25%胰蛋白酶消化传代。免疫细胞化学法SABC法鉴定HUVE细胞第VIII因子相关抗原呈阳性结果。(3)本实验室培养条件下,慢病毒感染HUVE的最佳MOI值为10,经PCR检测microRNA-302-367过表达慢病毒颗粒能有效感染HUVE。结论本研究成功地将hPFF体外重编程为iPSC;本研究于体外建立稳定的HUVE系;慢病毒颗粒可有效地感染hPFF、HUVE。