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选题依据:阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）是老年痴呆中较为常见的慢性神经退行性疾病。然而,迄今尚无一种理想的药物能够预防和改善AD。黄芩素是中药黄芩中含量较高的一种黄酮类化合物。课题组前期研究发现黄芩素不仅能延长果蝇的寿命,还能够改善D-半乳糖致衰老大鼠和快速老化小鼠SAMP8两种衰老动物模型的认知障碍。然而,黄芩素对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用及机制尚不清楚。目的:探讨黄芩素抑制Aβ25-35聚集及对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用,并基于JAK2/STAT1通路及代谢组学技术探讨黄芩素发挥神经保护作用的机制。方法:1.采用Th-T荧光实验,检测黄芩素抑制Aβ25-35聚集的作用。2.在Aβ25-35损伤的PC12细胞中,通过测定细胞活力、LDH释放率、细胞凋亡率、NO、IL-8、ROS、MMP、ATP和线粒体复合物I的水平,评价黄芩素的神经保护作用。3.采用Western bolt技术,研究黄芩素对Aβ25-35损伤PC12细胞模型中JAK2/STAT1通路蛋白表达的作用。4.采用LC-MS/MS代谢组学方法,得到黄芩素改善Aβ25-35损伤PC12细胞所调节的代谢物。结果:1.Th-T荧光实验表明黄芩素不仅能够抑制Aβ25-35的聚集,还对预先形成的Aβ25-35聚集纤维有解聚作用。2.黄芩素能够提高Aβ25-35损伤的PC12细胞存活,其机制可能与抑制细胞凋亡、减少LDH、NO和IL-8释放、抑制ROS生成并提高MMP、ATP和线粒体复合物I水平有关。3.Western bolt结果显示黄芩素可抑制JAK2、STAT1蛋白的磷酸化,以及下游炎症靶蛋白iNOS和COX-2的表达。4.LC-MS/MS代谢组学研究结果表明,与空白组相比,Aβ25-35损伤组共发现了6个差异代谢物,黄芩素可回调其中5个差异代谢物:L-精氨酸、4-胍基丁脯氨酸、烟酸、烟酰胺,涉及精氨酸和脯氨酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢通路。结论:黄芩素能够保护Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤,其作用机理与抑制Aβ25-35聚集、减少细胞凋亡、抑制JAK2/STAT1信号通路、调节精氨酸和脯氨酸代谢;烟酸和烟酰胺代谢等密切相关。