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精神和心理因素对人体健康的影响已是不争的事实。在现代社会中,超负荷的工作或学习的压力及其它各种因素正日益对人类的健康构成威胁。体内的糖皮质激素水平过度升高常常是机体处于应激状态的标志。大量的研究表明,长期过度的应激或巨大的精神压力会影响男性生殖功能。睾丸Leydig细胞(Leydig cell,LC)的主要功能是合成和分泌雄激素,其中睾酮是调节雄性生理功能最重要的激素。睾酮分泌不足将会导致一系列雄性生理功能异常。垂体分泌的间质细胞刺激素(LH)是调节Leydig细胞合成和分泌睾酮的主要因子。然而,近年来的研究发现,肾上腺皮质分泌的糖皮质激素(大鼠体内的糖皮质激素是皮质酮)通过抑制Leydig细胞中睾酮合成酶的活性和合成,导致睾酮合成量减少。已知体内的睾酮水平,除了与单个Leydig细胞合成睾酮的能力(指Leydig细胞中参与睾酮合成的酶的活性)相关外,还取决于Leydig细胞的数量,即;糖皮质激素还可通过控制睾丸中Leydig细胞的数量来影响体内的睾酮合成水平。由于细胞凋亡是影响细胞数量的重要因素,毫无疑问,Leydig细胞凋亡亦可导致睾酮水平下降。本研究采用应激大鼠作为动物模型,观察应激是否会导致Leydig细胞凋亡?应激导致Leydig细胞凋亡是否糖皮质激素直接作用的结果及其机制。本研究分为两个部分:
第一部分,观察应激能否通过诱导大鼠Leydig细胞凋亡,减少细胞数目,使睾酮合成和分泌量下降?对成年雄性SD大鼠进行连续21天的应激处理(捆绑倒挂、低温、足底电击、冰水游泳)建立应激大鼠模型。其次是采用酶联免疫法测定应激大鼠血清中皮质酮和睾酮改变情况。最后,经流式细胞术和电镜技术检测应激大鼠Leydig细胞凋亡情况。与对照组血清皮质酮水平(50±3ng/mL)、睾酮水平(5.8±0.2ng/mL)相比,应激大鼠血清中的皮质酮水平(110±5 ng/mL)呈显著升高(P<0.01),睾酮量(3.0±0.1 ng/mL)则显著降低(P<0.01);流式细胞术分析发现,与对照组凋亡率(2.3±1%)相比,应激大鼠Leydig细胞凋亡率(17.8±0.8%)显著增加(P<0.01);电镜分析表明,应激大鼠的Leydig细胞呈现皱缩和核染色质浓缩、边集等典型的凋亡早期的形态学改变,上述表明:应激可以导致大鼠Leydig细胞凋亡。
第二部分,研究应激导致Leydig细胞凋亡是否糖皮质激素直接作用的结果及其机制。由于应激引起的大鼠体内的内分泌反应不仅有糖皮质激素的升高还有儿茶酚胺等其他内分泌因子的改变。为评价由应激导致Leydig细胞凋亡是否糖皮质激素直接作用的结果,在本文的第一部分已证实有关应激确实可导致大鼠皮质酮水平升高的前提下,作者首先观察应激大鼠Leydig细胞中糖皮质激素受体(GR)的位置变化情况。其次是评价Leydig细胞内GR表达量的改变与细胞凋亡率变化的相关性。以进一步证实应激导致大鼠Leydig细胞凋亡是皮质酮直接作用的结果。其三是为了分析应激导致的儿茶酚胺浓度升高是否参与Leydig细胞凋亡。最后,是评价应激导致Leydig细胞凋亡的细胞信号通路。
研究表明:①应激可诱导Leydig细胞凋亡、减少Leydig细胞数目,导致睾酮合成和分泌减少。②应激导致的大鼠Leydig细胞凋亡是糖皮质激素直接作用的结果。高糖皮质激素介导的应激诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制是经死亡受体(FasL/Fas)触发的。其证据包括:应激大鼠体内皮质酮水平呈显著升高;应激大鼠Leydig细胞中GR呈现自胞浆到胞核的移位;GR表达量的改变与Leydig细胞凋亡率改变的呈显著的相关性;应激水平的儿茶酚胺未能增加Leydig细胞的凋亡率;应激大鼠Leydig细胞中FasL/Fas表达增加。