棉花盐胁迫诱导cDNA文库的构建与筛选及棉花金属硫蛋白基因功能分析

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棉花是较耐盐碱的作物之一,在盐碱地区有大面积种植,已取得良好的经济效益和社会效益。但棉花的耐盐能力仍然有限,常规品种耐盐能力一般只有0.3%。所以,要在盐碱地广泛种植棉花,必须进一步提高棉花的耐盐能力。国内外在这方面做了大量研究,然而分子水平的研究还有待于进一步的深入下去。因此本研究分别以耐盐棉花品种中棉19号为试材,构建了棉花盐胁迫诱导cDNA文库,并通过反向northern差异筛选法获得十七个与盐胁迫相关的棉花基因克隆。并选择5号和17号克隆为研究对象,对这两个克隆的序列及同源性分析表明二者属于棉花金属硫蛋白基因家族成员。金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类低分子量(6000~9000Da)、高Cys含量、具有金属结合能力的多肽,它具有独特的氨基酸排列顺序,即多肽的N端和C端具有两个富含Cys的金属结合结构域,其中的Cys按CXnC的方式排列。MT基因和蛋白广泛存在于动物、植物、真菌、绿藻中。植物金属硫蛋白有其独特的序列和结构特点。根据植物金属硫蛋白的结构特点,植物MT分为三类。5号克隆编码的GhMT1与17号克隆编码的GhMT2为棉花I类金属硫蛋白。对这两个基因进行序列比较、表达分析和功能鉴定。主要结果如下:1.利用Clontech K1053-1(634903)SmartTM cDNA Library Construction Kit构建棉花盐胁迫诱导cDNA文库,经效价测定完全合格。
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