茶树花多糖的提取、分离纯化、结构及其生物活性

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茶树花是茶(Camellia sinensis)树的生殖器官,属多年生草本植物,原产我国。茶树花含有多种有益成分,但是对其开发利用尚不充分。许多学者已经证实多糖具有多样的生理功能。目前国内外对茶树花多糖的研究报道较少,且不够系统。因此,本论文重点研究了茶树花多糖的提取与分离纯化,测定其体外抗氧化活性、体内肝保护活性以及体外抗肿瘤活性,并对其结构进行了初步鉴定。1.以茶树花为原材料,采用高效液相色谱法测定了茶树花中可溶性糖、儿茶素和游离氨基酸的含量。茶树花中含有216.85mg/g的可溶性糖,其花冠、雄蕊群和雌蕊群部分(F-1)及花托、萼片和花梗部分(F-2)的含量分别为250.94和112.65mg/g;茶树花中总儿茶素含量为37.03mg/g,且F-2中的含量(46.90mg/g)高于F-1(30.88mg/g);茶树花中含有包括茶氨酸在内的16种游离氨基酸,含量为10.87mg/g,虽然F-2中游离氨基酸的种类较少,但其含量(16.47mg/g)显著高于F-1(10.59mg/g)。2.取茶树花粉末以85%乙醇进行脱脂、去色素等预处理后90℃水浴浸提3次,离心取上清液,浓缩后乙醇沉淀、冷冻干燥后得茶树花粗多糖,得率为6.67-6.89%。利用DEAE-纤维素-52层析柱对茶树花粗多糖进行初步分离,得到三个组分TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3。对茶树花粗多糖、TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3进行了初步理化性质的研究,其总糖含量分别为29.80%、63.90%、34.94%和28.99%;其蛋白含量分别为5.05%、2.53%、2.37%和2.31%;其糖醛酸含量分别为22.75%、1.40%、37.69%和31.26%;其硫酸基含量分别为1.45%、2.63%、0.84%和1.76%。3.运用化学方法分别测量分析了粗TFPS、 TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3的体外抗氧化活性。结果表明:粗TFPS、 TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3体外能够清除DPPH-自由基、清除O2.自由基、清除HO·自由基、螯合Fe2+、还原Fe3+,具有一定的体外抗氧化活性。其中,粗TFPS具有较强的抗氧化效果;TFPS-1具有较强的清除DPPH·自由基活性与螯合Fe2+的能力;TFPS-3具有较强的清除O2·自由基活性和清除HO·自由基的活性。选用小白鼠动物模型实验研究分析了粗TFPS的体内肝保护活性。结果表明:应用粗TFPS处理可有效保护CC]4诱发的急性肝损伤;其中应用中剂量粗TFPS处理的效果最好,可以显著地抑制血清中ALT和AST的活性,显著地提高肝脏中SOD活性和GSH-Px活性以及降低肝脏中MDA的生成。运用MTT法研究分析了粗TFPS、 TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3对胃癌细胞BGC-823的体外抑制作用。结果表明TFPS-1和TFPS-3表现出较好的抑制活性,在200m g/ml培养了72h的条件下,其抑制率分别达到82.60%和83.73%。4.采用气相色谱法分析茶树花多糖的单糖组成,粗多糖单糖组成及摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:岩藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=10.17:49.52:2.58:1.49:2.68:11.54:22.04;TFPS-1单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖:岩藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=14.84:2.64:12.16:6.87:45.39:18.08;TFPS-2单糖组成及摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖=11.19:55.16:33.65;TFPS-3单糖组成及摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖=20.95:53.34:25.71。通过红外吸收光谱法(IR)分析得知茶树花多糖(粗TFPS、 TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3)在4000cm-1-400cm-1范围内呈现出典型的多糖吸收峰,说明这四种检测样品为多糖类物质。采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)对TFPS-1、 TFPS-2和TFPS-3的纯度进行了测定,结果表明:TFPS-3具有均一的分布特性,同时测定了其相对分子质量,为381.33KDa。
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