中国葡萄属野生种抗黑痘病基因RAPD标记作图

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本研究以中国野生葡萄和欧洲葡萄种间杂交组合 88-110(83-4-96×粉红玫瑰)的双亲及 F1代群体为试材,在田间人工接种鉴定的基础上,对双亲及 F1代进行 RAPD 分析,依据 RAPD 分析结果,进行抗黑痘病基因的 RAPD 标记作图。同时对获得的特殊 RAPD 标记 S353-1400 进行测序及酶切分析,取得的主要结果如下: 1. 采用田间人工接种黑痘病病原菌的方法,研究了中国野生葡萄和欧洲葡萄种间杂交组合 88-110(83-4-96×粉红玫瑰)F1 群体对黑痘病的抗性。结果表明,44 株 F1代中,抗黑痘病的为 20 株,感病的为 24 株,经卡平方检测(X2=0.2045*),符合 1∶1 比例分离。88-110 组合 F1 代,44 株中有 41 株的感病指数在双亲之间分布,占 93.18%。 2. 以 88-110 组合亲本 83-4-96 和粉红玫瑰为模板,444 个 10bp 随机引物有 341 个引物能在双亲间扩增出差异条带;然后用 341 个随机引物对葡萄黑痘病的抗性材料混合池和感病材料混合池为模板进行扩增,扩增出符合 1∶1 或 3∶1比例的 RAPD 标记用于构建遗传连锁图谱研究。利用 Mapmaker/Exp3.0 软件,在 LOD=3.0 设置下,24 个标记可形成一个连锁群,共覆盖 469.3cM,位点间平均距离 19.55cM,最小距离 5.9cM,最大距离为 36.4cM,与抗黑痘病基因最近的标记为 S353-1400(5.9cM)。 3. 将 S353-1400 用回收试剂盒回收,连接 T 载体并克隆,筛选、鉴定重组克隆。对重组质粒抽提、纯化和测序。测序结果为 S353-1400 序列的实际长度是1371bp。 4. 用 Wingene 231 DNA 分析软件对 S353-1400 序列的限制性内切酶位点进行了分析,有 141 个(可识别 6 个及其以上序列碱基位点)限制性内切酶在S353-1400 序列上存在酶切位点,并且在 1147bp 处有一 EcoR I 酶切位点。 5. 在 GenBank 中对 S353-1400 的 DNA 序列进行了相似性分析,表明序列与其它生物体序列同源性较小,为中国野生葡萄基因组所特有。S353-1400 在第<WP=6>1293-1321bp 间的 28 个碱基与拟南芥 2 个编码 bHLH(碱性-螺旋-环-螺旋)转录因子有关的核酸序列具有相似性。
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