硼酸盐对芒果胶孢炭疽菌和链格孢菌线粒体蛋白表达的影响

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本研究利用双向电泳技术(2-DE)和MALDI-TOF-TOF-MS质谱技术研究四硼酸钾对胶孢炭疽菌和链格孢菌线粒体蛋白表达的影响。并采用荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR)探究其转录和翻译水平上的相关性。研究结果如下:(1)通过双向凝胶电泳,PDQuest(Ver8.0,Bio-Rad)软件,芒果炭疽菌线粒体蛋白图谱中共检测到约600个蛋白点,并分析得到115个差异表达蛋白点,通过质谱分析,有58个差异蛋白被成功鉴定;芒果链格孢菌线粒体蛋白图谱中共检测到约600个蛋白点,并分析得到110个差异表达蛋白点,通MALDI-TOF-TOF质谱分析,有56个差异蛋白点被成功鉴定。(2)通过对芒果炭疽菌线粒体58个差异蛋白点的表达分析,有12个蛋白点差异表达显著上调,25个蛋白点差异表达显著下调,21个蛋白点差异表达都不单一,既有上调表达,也有下调表达。对芒果链格孢菌线粒体56个差异蛋白点的表达分析,有11个蛋白点差异表达显著上调,14个蛋白点差的异表达显著下调,31个蛋白点中每个蛋白差异表达不单一。(3)对芒果炭疽菌线粒体58个差异蛋白点进行功能分析并将它们分为8个大类,分别是电子传递链类(38%),翻译后修饰、蛋白折叠和分子伴侣类(15%)、核酸代谢类(13%)、其他与未知功能类(12%)、跨膜运输类(8%)、氨基酸运输与代谢类(7%)、信号传递类,(2%)。对芒果链格孢菌线粒体56个差异蛋白点进行功能分析并将它们分为8个大类,分别是其中电子传递链类(54%),翻译后修饰、蛋白折叠和分子伴侣类(16%);三羧酸循环类(10%);未知功能蛋白(10%);氨基酸运输与代谢类(3%);碳水化合物代谢类(3%);核酸代谢类(2%);跨膜运输类(2%)。在上述分类中,芒果炭疽菌和链格孢菌的最大功能类群都是电子传递链相关蛋白和翻译后修饰、蛋白折叠和分子伴侣相关蛋白。(4)利用KOBAS网站对芒果胶孢炭疽菌的58个差异蛋白进行了KEGG pathway分析,有12个差异蛋白参与了25个通路,根据通路所进行的生物学功能对这25个通路进行分类,可分为碳水化合物代谢类途径、能量代谢类途径、氨基酸代谢类途径、核苷代谢类途径及其他代谢途径5大类通路途径。其中最多差异蛋白参与的通路途径是能量代谢相关途径。芒果链格孢菌58个差异蛋白的KEGG pathway分析,有14个差异蛋白参与了 18个通路,根据通路所进行的生物学功能对这18个通路进行分类,可分为碳水化合物代谢类途径、能量代谢类途径、氨基酸代谢类途径、维生素辅助因子代谢类途径及其他代谢途径5大类通路途径。其中差异蛋白参与最多的的通路途径也是能量代谢相关途径。(5)根据差异蛋白的不同生物学功能分类,分别选择17个芒果炭疽菌线粒体差异蛋白和20个芒果链格孢菌线粒体差异蛋白所对应的基因表达量变化进行RT-qPCR检测。发现差异蛋白表达与其相对应的基因表达有一定的相关性,但也有个别不一致的情况。因此,在进行蛋白水平测定的同时,从转录水平进行检测是有必要的。
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