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本试验以新鲜的牦牛血为原料,运用单因素以及响应面分析方法对Ig G的提取工艺进行了优化;并用DEAE-52离子层析以及Sephadex-G200凝胶过滤层析对Ig G做了进一步的纯化。结果如下:(1)超声波辅助饱和硫酸铵法提取牦牛血中Ig G的最佳工艺条件为:超声时间4min、超声后静置时间24min、p H 4.3、温度49℃。在此条件下Ig G含量为25.22mg/ml,与预测值25.79mg/ml的相对误差为2.20%,较单纯的饱和硫酸铵法的静置时间减少了66min。(2)PEG/K2HPO4双水相法提取牦牛血中Ig G的最优工艺参数为:13%(w/w)PEG、17%(w/w)K2HPO4、11%(w/w)Na Cl、p H 6.0。在此条件下Ig G含量为13.90mg/ml,与预测值14.04mg/ml的相对误差为0.96%,此时纯度达到70.50%。(3)PEG/HPS双水相法提取牦牛血中Ig G的最优工艺参数为:6.5%(w/w)PEG、17.5%(w/w)HPS、14%(w/w)Na Cl、p H 6.1。在此条件下Ig G含量为12.48mg/ml,与预测值12.67mg/ml的相对误差为1.49%,此时纯度达到63.30%。(4)通过对两种双水相提取方法的综合比较,得出PEG/K2HPO4双水相法提取牦牛血中Ig G的方法较优,因此,后续使用PEG/K2HPO4双水相法提取的粗Ig G进行纯化。(5)DEAE-52离子层析纯化粗Ig G的最优工艺参数为:上样体积0.9ml、PBS溶液的p H7.4、流速0.8ml/min,在此条件下Ig G的纯度达到88.79%,回收率为44.89%。并采用Sephadex-G200的凝胶层析对Ig G做进一步纯化,Ig G的纯度达到95.80%,回收率为38.80%。(6)对Ig G进行纯度鉴定,电泳条带呈单一条带,已达到电泳纯,Ig G的H链的分子量约为60KD,L链的分子量约为23KD。综上所述,PEG/K2HPO4双水相提取牦牛血中Ig G的方法优于PEG/HPS双水相法,通过DEAE-52的离子交换层析以及Sephadex-G200的凝胶过滤层析,可得到电泳纯的Ig G,分子量约为166KD。