三种新型DNA电化学生物传感器的研制及其在DNA检测中的应用

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脱氧核糖核酸(简称为DNA)是生物遗传信息的载体,研究它的序列组成对了解遗传疾病的根源以及疾病的预防有着重要的意义。设计出快速、灵敏、选择性高的DNA电化学生物传感器一直是生化工作者致力研究的一个重要方向。本论文通过DNA的循环杂交反应和对电极表面进行修饰,研制了三种不同的DNA电化学生物传感器,并对其检测DNA的能力进行了考察。  (1)利用Nb.BbvCl限制性内切酶和Klenow聚合酶的特性设计了一个DNA的聚合剪切循环反应,之后再利用环DNA的滚环放大效应在金电极表面生成一条长的ssDNA。然后以氯化六氨合亚钌为电信号指示剂,设计了一个灵敏的DNA电化学生物传感器。通过循环伏安法(CV)和交流阻抗法(EIS)对电极进行表征以确保DNA的连接及杂交循环反应正常进行。在优化好的条件下考察了对目标DNA的响应范围及工作曲线。其检测线性范围为1.0×10-9~1.5×10-8mol·L-1,检测限为6.6×10-10mol·L-1(S/N=3)。  (2)将银纳米粒子沉积到碳纳米管修饰的玻碳电极表面,同肘利用杂交链式反应进行放大,以邻菲罗啉钴为指示剂,制备了一种新的灵敏度高的DNA电化学生物传感器。通过循环伏安法(CV)和交流阻抗法(EIS)对电极进行表征以确保DNA的连接及杂交循环反应正常进行。由于碳纳米管和银纳米粒子的修饰,大大增强了玻碳电极的有效表面积及导电性能,提高了该电化学生物传感器的灵敏度。考察了对目标DNA的响应范围及工作曲线。其检测线性范围为1.0×10-10~1.4×10-9mol·L-1,检测限为1.35×10-11mol·L-1(S/N=3)。  (3)合成了3种氨基酸水杨醛配体,7种氨基酸水杨醛金属配合物并用红外光谱对其结构进行了表征。筛选出微分脉冲伏安信号较好的苯丙氨酸水杨醛钴配合物,考察了其与ssDNA的结合能力与作用机理。在优化好的实验条件下制作了检测ssDNA的工作曲线,测定了检测限。对ssDNA的检测线性范围为1.0×10-9~1.30×10-8mol·L-1,检测限为9.33×10-10mol·L-1(S/N=3)。
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