目的：虽然已经明确了HPSE在肿瘤转移中的相关作用，但还有很多方面有待研究，为了研究HPSE在肿瘤发生、肿瘤浸润、转移及血管生成中所起的作用，获得大量的HPSE以及其抗体，就显得很有必要。本研究利用原核表达系统获得相关HPSE抗原，成功得到以包涵体形式表达的人全长HPSE蛋白，并运用杂交瘤技术获得抗HPSE的单克隆抗体。方法：依据NCBI上公布的人HPSE cDNA序列，设计可以克隆HPSE全长片段的引物，选择NcoⅠ和XhoⅠ作为酶切位点，将HPSE全长基因片段连接到pET28a(+)质粒上，在大肠杆菌中表达HPSE蛋白；探索不同诱导时间、不同浓度的诱导剂IPTG以及所用的培养基对重组人HPSE蛋白表达的影响；运用HisTrap TMcrude柱得到纯度较高的重组人HPSE蛋白。本室自制的重组人HPSE50kDa蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术将SP2/0与免疫B淋巴细胞融合，间接ELISA检测抗体分泌情况，ELISA所用的抗原为重组人HPSE全长蛋白、重组人HPSE50kDa蛋白以及人HPSE多肽Lys158-Cys172，该多肽包含底物肝素与HPSE结合的特定序列，即HPSE的活性位点。阳性克隆进行多次筛选以及亚克隆，得到抗HPSE的单克隆抗体。Western blot检测所制备的抗原与抗体结合的特异性。结果：成功在大肠杆菌中表达出重组人HPSE全长蛋白，并得到其最佳表达条件为：IPTG浓度为1mmol/L，诱导时间为5h，在2×YT培养基中诱导时目的蛋白表达量最高。成功的筛选出两株特异性较好抗HPSE的单克隆抗体，4D12、3F5效价均大于1:1.28×105，其亲和力常数分别为2.71×109M-1、6.67×108M-1，4D12与50kDa HPSE、人全长HPSE反应，3F5与50kDa HPSE、人全长HPSE以及HPSE50kDa N端的Lys158-Cys172多肽反应。结论：成功构建了人HPSE原核表达系统，并筛选出两株特异性好抗HPSE的单克隆抗体。