【摘 要】
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鸽Ⅰ型副粘病毒（Pigeon paramyxovirus 1,PPMV-1）病又称鸽新城疫（Newcastle disease,ND）是一种由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起鸽的高度接触性传染病,具有高传染性、高传播率和高致死率,已成为对我国养鸽业危害最大的疾病之一。本研究对广西地区2020-2023年间鸽和野鸟临床样品进行分离鉴定,进一步对分离株进行全基因
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鸽Ⅰ型副粘病毒（Pigeon paramyxovirus 1,PPMV-1）病又称鸽新城疫（Newcastle disease,ND）是一种由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起鸽的高度接触性传染病,具有高传染性、高传播率和高致死率,已成为对我国养鸽业危害最大的疾病之一。本研究对广西地区2020-2023年间鸽和野鸟临床样品进行分离鉴定,进一步对分离株进行全基因组测序、遗传进化分析和毒力测定。因目前我国还没有商用鸽新城疫疫苗,本研究选择使用强毒力分离株进行油乳剂灭活苗制作,检测其免疫原性和免疫保护效力,并构建病毒基因组全长c DNA克隆,为其反向遗传操作系统的搭建和后续鸽新城疫抗原匹配疫苗的开发打下基础。1.PPMV-1的分离鉴定、全基因组序列测定及遗传进化分析本研究对广西部分城市合计1289份鸽和野鸟临床样品进行PPMV-1流行病学调查,从养殖场和活禽市场的鸽样品中检出6份阳性样品,并成功分离出2株PPMV-1毒株,将其命名为GXN1和GXN2。全基因组测序结果表明,2株分离株全长15192nt,其基因组结构顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’,符合NDV基因组特征,F蛋白裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株特征。遗传进化分析结果表明,2株分离株同属VI.2.1.1.2.2基因亚型,且与La Sota、B1、Clone30和V4等传统疫苗株遗传关系较远。2株分离株F蛋白在信号肽区突变较多,在融合肽区及2个七肽重复区有部分氨基酸位点突变;HN蛋白中和表位共有6个氨基酸位点发生突变,其中2个突变存在于HN蛋白的一个线性抗原表位345-353处。2.分离株毒力测定及免疫原性研究采用世界动物卫生组织（World organization for animal health,WOAH）标准对2株分离株的鸡胚平均致死时间（MDT）和1日龄鸡脑内致病指数（ICPI）进行测定,结果表明GXN1为强毒株,GXN2为弱毒株。用GXN1株对雏鸽进行攻毒,攻毒组鸽致死率达100%,死亡高峰期在第5-9天。La Sota株和GXN1株交叉血凝抑制试验结果表明,二者抗原相关系数“R”值为0.67,表明二者之间存在抗原性差异。将GXN1株制备成符合中国兽药典规定的灭活油乳剂疫苗,通过颈部皮下注射接种30日龄雏鸽,并于首次接种后14天进行二次免疫,结果表明在GXN1灭活苗免疫后第21天所有鸽体内抗体HI效价在6（log2）以上,在第28天HI效价平均值为7.4（log2）,略微高于La Sota灭活苗组和活疫苗组。攻毒保护试验发现La Sota活疫苗组的10只鸽有2只发病死亡,La Sota灭活苗组10只鸽有1只发病死亡,而GXN1灭活苗组鸽无明显异常。3.GXN1株全长c DNA克隆构建以严谨型质粒p BR322作为克隆载体,并在载体中引入T7启动子、丁型核酶核心序列以及T7终止子等辅助元件。将GXN1株全长c DNA分为5个片段进行扩增,通过同源重组技术将完整基因组分3次克隆,经测序验证后成功构建了GXN1株全长c DNA克隆,为后续病毒的拯救工作及其反向遗传操作系统的搭建奠定基础。
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