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人55型腺病毒（HAdV55）是近年来发现的由HAdV11与HAdV14重组而来的新型B种腺病毒。由于HAdV55在人群中的预存免疫普遍较低,容易在人群密集的地方如医院、军队、学校等地爆发,可致重症呼吸道疾病甚至死亡,给社会带来严重危害。为减少HAdV55爆发带来的危害,我们亟需一种能够有效阻止其在人群中传播的药物。抗体是指在抗原刺激下由浆细胞产生的一种呈Y字型、对机体具有保护作用的蛋白质,单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的抗体,具有高度均一、仅能针对某一特定抗原表位的特点。抗体与相应抗原结合之后可以阻断抗原对机体的感染,在临床上广泛用于疾病的诊断、治疗及预防,而目前针对可引起严重暴发感染的HAdV55抗体制备的相关研究报道很少,因此本课题拟在本实验室已有HAdV55候选疫苗及HAdV14-55高变区嵌合病毒的基础上,利用单细胞PCR技术,从免疫猕猴中克隆出HAdV55特异性的单克隆抗体,并进行活性分析和表位分析。本论文的主要研究工作概括如下:研究目的获得具有良好结合、中和作用的HAdV55单克隆抗体,以期用于HAdV55的治疗;鉴定抗体与HAdV55的结合表位与中和表位,以期为HAdV55的预防、诊断及抗病毒药物的研发提供研究基础。研究方法利用本实验室已有的HAdV55候选疫苗,免疫中国猕猴;免疫后猕猴采血并分离PBMC,利用流式细胞仪分选出单个的HAdV55特异性的记忆B细胞;利用单细胞PCR技术,获得单克隆抗体基因序列,并将其克隆到表达质粒上,在哺乳动物细胞中表达单克隆抗体;SDS-PAGE蛋白胶电泳后进行考马斯亮蓝染色检测抗体的表达,而后利用ELISA检测抗体的结合活性,利用微量中和实验检测抗体的中和活性;利用HAdV 14-55高变区嵌合病毒（HAdV14-55HVR）分析抗体与病毒作用的中和表位。研究结果利用流式细胞仪共分选了3块96孔板共计276个记忆B细胞,利用单细胞PCR技术克隆获得了具体47对抗体基因,首先选择其中的21对基因进行表达验证,表达之后得到15个具有结合活性的抗体,13个具有中和活性抗体。对其中7个抗体大量表达纯化浓缩之后进行效价测定及表位分析发现,有1个抗体与HAdV55的Fiber表位相互作用,6个抗体与HAdV55的Hexon表位相互作用;这些抗体进行中和效价测定结果显示,其中28A1、28A5、28F3、29A10这4个单克隆抗体具有较高效价,它们的IC50分别为0.2697ng/ml、0.1981ng/ml、0.4025ng/ml、0.5575ng/ml,能够有效的中和完整的HAdV55病毒颗粒。对结合Hexon抗体的中和表位研究发现,抗体中和表位可能为HVR1、HVR2、HVR7,但是需要更多样本量验证。结论通过单细胞PCR技术可快速克隆得到HAdV55特异性抗体基因;通过单细胞克隆法制备得到的抗体具有良好的结合活性、中和活性;通过HAdV14-55HVR鉴定抗体中和表位,推测HAdV55特异性单克隆抗体的中和表位可能为HVR1、HVR2、HVR7,但需要更多的样本量来佐证。