目的：运用化疗药物阿霉素(doxorubicin，DOX)处理白血病细胞株K562，诱导获得性耐药的产生，检测细胞耐药、凋亡相关基因的表达水平，初步探讨获得性耐药产生的机制；研究环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)特异性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用，观察Celecoxib对多药耐药基因mdrl及其相关调节基因表达的影响，初步探讨其逆转多药耐药的作用机制。 方法： 1.K562细胞经不同浓度DOX分别作用不同时间后，用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及流式细胞仪(FCM)检测各组细胞。mdrl及其编码的P-糖蛋白(P-glycoproteln，P-gp)的表达水平，寻找DOX诱导获得性耐药的最佳作用时间和剂量。经RT-PCR方法检测获得性耐药K562细胞中TopoII、GST,MRP,NF-kappaB,YB-1等耐药相关基因和凋亡抑制基因Survivin的表达情况；免疫荧光染色方法检测Survivin蛋白表达强度；Westernblot法检测诱导过程中细胞核内NF-kappaB表达变化，评价其活化程度。 2.采用四唑蓝(MTT)比色法检测MCF-7/ADR细胞对DOX敏感性，分析联合应用低剂量Celecoxib时DOX对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration，IC50)，计算增敏倍数；FCM观察Celecoxib作用对细胞周期的影响，并检测P-gp蛋白表达水平，罗丹明外排实验测定P-gp蛋白功能；RT-PCR和Western blot方法检测耐药相关调节基因和蛋白的表达变化。 结果： 1.随着DOX作用浓度的增加和作用时间的延长，mdr-1及P-gp的表达逐渐上调，DOX浓度为0.5 uM，作用时间为48h即能诱导K562细胞产生获得性耐药；在获得性耐药细胞中MRP基因的表达亦上调，TopoII表达量下降，GST则无明显变化，转录因子NF-kappaB和YB-1的表达亦上调；在耐药诱导过程中，NF-kappaB蛋白呈剂量依赖性方式活化，NF-kappaB的活化可能与获得性耐药的产生有关；此外，凋亡抑制基因Survivin及其编码蛋白的表达水平亦上调，表明细胞凋亡减少也是获得性耐药产生机制之一。 2.Celecoxlb对MCF-7/ADR的多药耐药具有明显逆转作用，10uM和20uM浓度的Celecoxib均可以明显提高MCF-7/ADR对DOX的敏感性，平均增敏倍数分别为1.81和3.72倍；当Celecoxib浓度为25uM作用24h后，与对照组相比，MCF-7/ADR细胞中P-gp表达量和功能均下降，细胞周期检测结果显示G1期细胞增多，S期细胞显著减少(P<0.05)，Celecoxib 50 u M与25 u M的作用相似，无统计学差异；用RT-PCR方法可观察到在Celecoxib作用下，mdrl、Survivin、VEGF、COX-2、YB-1、c-Jun等在基因和蛋白表达水平上均下调，尤以c-Jun变化最为明显，而NF-kappaB,Topo II基因表达无明显变化。 结论： 1.DOX以剂量和时间依赖性方式诱导K562细胞产生获得性耐药，多种耐药相关基因及凋亡相关基因Survivin共同参与获得性耐药的形成。 2.Celecoxib可逆转MCF-7/ADR对DOX的耐药作用；Celecoxib逆转耐药的机制可能是使耐药细胞阻滞在G。期、降低VEGF表达水平、抑制抗凋亡蛋白Survivin及下调mdrl基因及其编码的P-gp的表达量和药物外排泵功能；Celecoxib可通过mdrl的上游调节因子如COX-2、YB-1、c-Jun等对其进行转录调节。