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目的:猪屎豆Crotalaria pallida Ait.为豆科(Faboideae)蝶形花亚科(Papilionoideae)野百合属(Crotalaria Linn.)植物,文献报道该属植物主要含有生物碱、黄酮及其苷等成分。目前对猪屎豆的化学成分和药理作用研究较少。为了阐明其药效物质基础,本文对猪屎豆种子的化学成分进行系统研究,并对分离得到的化学成分进行抗炎活性筛选。 方法: 1.采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20等多种色谱方法对猪屎豆种子化学成分进行研究,根据理化性质、光谱和波普数据对分离得到的化合物进行结构鉴。 2.采用由LPS(脂多糖)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生NO代谢的炎症模型,并利用CCK-8试剂测试细胞活力,对分离得到的单体化合物进行抗炎活性筛选。 结果:从猪屎豆种子75%的乙醇提取物中分离并鉴定29个化合物,包括9个酚酸类,9个黄酮类,6个生物碱类,3个甾醇类,1个神经鞘脂类,1个倍半萜类。对18个化合物进行抗炎活性筛选,实验结果表明,其中9个化合物在50μmol/L时对小鼠巨噬细胞RAW264.7有细胞毒,分别是1-EF-3、ZSD-4、ZSD-6、ZSD-8、ZSD-11、ZSD-13、ZSD-15和ZSD-19,其余10种化合物均有一定的抑制LPS刺激细胞产生NO的作用。 结论:分离得到的29个化合物中,6个为新化合物,分别是1个黄酮:Pallacacetin(ZSD-35);2个高异黄酮:Pallivone A(ZSD-13)和Pallivone B(ZSD-11);3个生物碱:N-oxide of usaramine(ZSD-27)、Pallisine A(ZSD-29)和Pallisine B(ZSD-24)。13个化合物是首次从该植物中分离得到:stigmast-5-ene-3,4-diol(1-EF-1)、7,8-二甲基异咯嗪(ZSD-2)、Ethyl(E)-3-[2,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-7-methoxy-3-ethoxycarbonyl-1-benzofuran-5yl]propenoate(ZSD-4)、4,4-二(1-丙烯酸甲酯)-3-甲氧基-二苯醚(ZSD-5)、Obovatachalone(ZSD-6)、Alpinumisoflavone(ZSD-8)、Cystosphaerol(ZSD-9)、N-palmitoylocta-decasphinga-4(E),8(E)-dienine(ZSD-12)、4,4-二(1-丙烯酸甲酯)-3-甲氧基-二苯醚(ZSD-14)、5,3,4-trihydroxy-2",2"-dimethylpyrano(5",6"∶7,8)isoflavone(ZSD-15)、Isoswertisin-2"-α-L-rhamnoside(ZSD-18)、Sonchifolinin B(ZSD-23)和(-)-methyl dihydrophaseate(ZSD-32)。抗炎活性筛选实验中,化合物1-G-S4和ZSD-5显示较强的抗炎活性,IC50分别为16.07和29.9μmol/L。 副篇地黄质量标准研究: 1.地黄的薄层色谱鉴别:建立了地黄的薄层色谱鉴别条件,选定了指标性成分,并进行了方法学考察。生地黄的TLC方法:以梓醇和毛蕊花糖苷为指标成分,用MN或Merck硅胶板,以乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸∶水=14∶3∶1∶1.8为展开系统。熟地黄的TLC鉴别方法:以5-羟甲基糠醛和毛蕊花糖苷为指标成分,用MN普通254或MN高效254硅胶板,展开条件为第一次展开4cm∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸∶水=15∶2∶1∶1.4,第二次展开7cm∶石油醚∶乙酸乙酯=8∶3。显色剂都为10%硫酸乙醇。 2.地黄水分、灰分等相关检查项目的限度研究:建立了地黄的水分、灰分、浸出物等相关检查项目的限度。生地黄7h干燥失重不得超过15%,水溶性浸出物不得低于66%,醇溶性浸出物19%,总灰分不得超过7.5%,酸不溶性灰分不得超过3.5%。熟地黄7h干燥失重不得超过15%,水溶性浸出物不得低于65%,醇溶性浸出物25%,总灰分不得超过10%,酸不溶性灰分不得超过5.O%。 3.地黄含量测定指标成分的确定:确定了洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷三个苯乙醇苷类成分作为地黄质量控制的指标成分。