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探索并建立适合家蚕卵的石蜡切片技术体系;获得家蚕典型胚胎发育时期的显微实体照片,印证补充前人关于家蚕胚胎发育的文字描述、示意图或手绘图,为家蚕胚胎发育基因功能研究提供形态学参考照片;探索并初步建立家蚕免疫组化技术体系,为在组织和细胞水平研究基因功能奠定基础。以KOH溶液作为卵壳软化液,设置浓度梯度和软化时间梯度,摸索最佳软化时间;摸索适合家蚕卵的固定、透明、染色方法;利用已建立的石蜡切片技术体系,以不同发育时期的家蚕日系N4品种非滞育卵为材料进行石蜡切片,获得较为系统的典型胚胎发育时期的显微实体照片;以家蚕日系N4品种5龄3天幼虫精巢为材料,以家蚕Mago蛋白IgG为Ⅰ抗,摸索免疫组化方法,建立免疫组化技术体系,获得家蚕Mago蛋白组织定位信息。研究结果如下:1.以家蚕日系N4品种非滞育卵为材料,用10%KOH溶液软化卵壳5min,用Smith液固定,用松油醇(Terpineol)脱水兼透明,建立了家蚕卵石蜡切片技术体系。2.获得了较为系统的家蚕典型胚胎发育时期的实体照片,这些时期包括胚盘形成、胚带形成、中胚层分化、头胸部突起显现、腹部突起显现、反转前、反转、反转后、器官形成等典型发育时期。还观察到了卵黄细胞的形成过程,区分了合胞体胚盘和细胞胚盘,得到了胚胎中肠、背血管、神经索、生殖腺、丝腺等组织图片。用连续切片技术观察到了类原始生殖细胞存在于中胚层突起处。3.影响免疫组化结果的因素主要有抗体的纯度,Ⅰ抗和Ⅱ抗最佳稀释度组合,抗原修复、封闭、洗涤、抗体孵育、显色等步骤的时间等。本研究确定的Ⅰ抗和Ⅱ抗最佳稀释度组合为Ⅰ抗1:1000,Ⅱ抗1:500。4.家蚕Mago蛋白精巢组织的免疫定位结果表明,家蚕Mago蛋白存在于整个精巢组织中,但主要位于精母细胞、精子束细胞和结缔组织细胞的细胞核内。总之,通过本研究,建立了一套家蚕卵石蜡切片技术体系,具有简便、快速、完整性好、能大批量进行切片等优点,能够满足家蚕胚胎发育基因功能研究的需要;获得了较为系统的家蚕典型胚胎发育时期的实体照片,印证补充了前人关于家蚕胚胎发育的文字描述、示意图、手绘图;探索了家蚕免疫组织化学技术,并对其中的关键环节进行了探讨和标准化,初步建立了一项可重复、稳定性好、适合家蚕组织的蛋白定位方法,获得了家蚕Mago蛋白在家蚕精巢组织的定位结果。