从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其含有一个CHCH保守结构域,将其命名为BmCH(Genbank登录号为:ABF51514.1)。该序列的开放阅读框大小为435bp,编码144个氨基酸残基,预测编码蛋白的分子量大小为14.82kDa,等电点为8.549。　　 根据cDNA序列的ORF设计了上下游引物,PCR扩增后经EcoR I和Xho I双酶切,插入融合表达载体pET-28a(+)的相应酶切位点,成功构建重组质粒pET-28a-BmCH,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经PCR、酶切鉴定后证实重组正确。用IPTG诱导后裂解菌液经SDS-PAGE分析,约在20 kDa处有一特异性蛋白条带,超声破碎重组菌后发现融合蛋白主要以包涵体的形式存在,通过亲和层析纯化获得较纯的融合蛋白。将该蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。ELISA检测该抗体的效价达1:12800。通过Western blot和荧光定量PCR的方法检测BmCH蛋白在家蚕四个发育时期和五龄幼虫多个组织中的转录水平和表达情况,发现该蛋白在卵、五龄幼虫、蛹、蛾四个发育时期均有表达,其中五龄幼虫中表达量最高;该蛋白在五龄幼虫的表皮、肠、睾丸、马氏管和卵巢中有明显表达,血、丝腺、脂肪表达量较少,但差异不大,气管和头中没有表达。和荧光定量PCR检测结果基本一致。利用抗体的免疫荧光标记对BmCH蛋白在家蚕BmN细胞中的定位进行研究,观察到荧光主要集中在细胞质中。本研究结果为进一步研究家蚕BmCIH蛋白的结构和功能奠定基础。