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目的：国内外研究报道非小细胞肺癌组织(NSCLC)常有EGFR和COX-2高表达,并常与肺癌发生、发展、侵袭和转移等生物特性有密切关系。本研究探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂厄罗替尼(Erlotinib)联合环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)联合干预肺腺癌A549细胞后是否具有协同杀伤作用,并对其机制进行初步研究,从而为非小细胞肺癌治疗提供新的思路。方法：厄罗替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48h后,倒置相差显微镜观察细胞形态；四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞抑制率；Hoechst33258法、TUNEL和Annexin V/PI法检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期；免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达。实验数据以x±s表示,用SPSS 11.5软件进行t检验、χ2检验和方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果：1、倒置相差显微镜下形态学观察①未加药的正常A549设为空白对照组：细胞形态正常,细胞紧密贴壁,边界清楚透明度高,生长旺盛,可见各期核分裂相。②50μmol/L厄罗替尼单药组：细胞体积明显缩小,细胞间隙增大,细胞贴壁减慢,胞内出现颗粒,可见细胞碎片。③25μmol/L塞来昔布单药组：细胞略变圆缩小,空泡和颗粒增多,形态改变,细胞间隙增大。可见少量的凋亡小体。④50μmol/L厄罗替尼+25μmol/L塞来昔布联合用药组：相比单药组细胞明显皱缩变圆脱落,颗粒增多开始碎解,见细胞碎片和凋亡小体。2、四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测药物对细胞生长的抑制作用厄罗替尼和塞来昔布单独或联合应用后,应用MTT检测生长抑制率提示两者分别对A549细胞的杀伤效应呈剂量依赖性和时间依赖性。单药厄罗替尼(50μmol/L)、塞来昔布(25μmol/L)作用48小时的细胞抑制率依次为(34.35±2.77)%、(26.66+2.12)%,厄罗替尼(50μmol/L)联合塞来昔布(25μmol/L)组抑制率为(50.33±3.27)%明显高于单药组(P<0.05)。3、药物联合治疗后的凋亡效应Hoechst33258染色法结果显示：空白对照组核形态均匀,未见边聚现象,胞内染色均一,形状规则,细胞联系紧密。而药物处理组均见细胞缩小,形态异常,胞质染色较深,荧光增强、染色质浓缩、碎片,可见凋亡小体形成。对照组的凋亡率为(0.78±0.04)%；而联合用药组凋亡率为(63.37±2.12)%,显著高于单用厄罗替尼组的(32.56±1.67)%和塞来昔布组的(25.67±1.98)%。TUNEL染色法：凋亡阳性细胞的判断：凋亡细胞表现为细胞胞核呈棕黄色着色,细胞浆不着色。实验中加药组均可见凋亡阳性细胞,联合加药组凋亡现象显著(P<0.05)。对照组的(0.95±0.24)%,联合用药组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%显著高于单用厄罗替尼组的(32.56±1.67)%和塞来昔布组的(25.67±1.98)%(P<0.05)。Annexin V/PI法结果显示：正常对照组早期凋亡率为(0.86±1.3)%,50μmol/L厄洛替尼联合25μmol/塞来昔布处理A549细胞48h后,可见(52.47±2.3)%的细胞凋亡,明显高于50μmol/L厄洛替尼、25μmol/塞来昔布单独用药的细胞凋亡率分别为(30.24±1.7%)、(22.13±1.2)%。4、药物对细胞周期的影响厄罗替尼、塞来昔布均可以阻滞细胞周期,引起G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少。与单药组相比,联合用药组G0-G1期阻滞作用明显(P<0.05)。5、免疫荧光法检测药物对细胞EGFR和COX-2蛋白的影响A549细胞中EGFR和COX-2均有表达。空白对照组EGFR和COX-2荧光很强,可见两者在A549细胞中均高表达。厄罗替尼及塞来昔布单药组EGFR和COX-2表达均减弱,而联合用药后EGFR和COX-2表达均显著减弱,具有统计学意义(P<0.05)。结论：厄罗替尼与塞来昔布联合应用具有协同抑制细胞生长,介导细胞凋亡作用,机制可能与两者均可阻滞细胞周期于GO/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径有关。