原发性肝癌浸润淋巴细胞CD4~+T与CD8~+T及其亚群的表达分析

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目的通过流式细胞分析技术,分析原发性肝癌患者癌组织组、癌旁组织组和对照组肝组织浸润T淋巴细胞表面标志CD45RO、CD62L和CCR7表达特点及差异,了解记忆T细胞亚群在原发性肝癌肿瘤组织淋巴细胞的分布特点,为记忆T细胞在抗肿瘤免疫中的作用提供研究基础。方法获取原发性肝癌患者以及因良性病变而行肝切除的患者新鲜肝组织,制备组织单细胞悬液,再分离获得组织浸润淋巴细胞。获得的淋巴细胞用抗CD3、CD4、CD8、CD45RO、CCR7、CD62L荧光抗体染色,用流式细胞仪进行检测各表面标志的表达情况。结果1、乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD4~+T细胞占浸润淋巴细胞的比例分别为(21.38±3.72)%、(10.12±2.42)%、(4.14±4.34)%。乙肝肝癌组显著高于乙肝癌旁组及对照组,差异有统计学意义(P=0.000, P=0.001; P <0.05),乙肝癌旁组高于对照组,差异亦有统计学意义(P=0.019<0.05)。2、乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD8~+淋巴细胞占浸润淋巴细胞的比例分别为(25.10±5.46)%、(21.70±2.6)%、(40.40±13.93)%,乙肝肝癌组及乙肝癌旁组显著低于对照组,差异有统计学意义(P=0.014, P=0.004; P<0.05),而乙肝肝癌组与乙肝癌旁组肝组织浸润CD8~+淋巴细胞比例之间的差异无统计学意义(P=0.651, P>0.05)。3、乙肝癌旁组及对照组肝组织浸润淋巴细胞中CD8~+淋巴细胞的比例显著多于CD4~+淋巴细胞(t=-7.7, P=0.00<0.05;t=-8.15, P=0.00<0.05),而乙肝肝癌组肝组织浸润淋巴细胞中CD8~+淋巴细胞的比例与CD4~+淋巴细胞无显著差异(t=-1.43,P=0.19>0.05)。乙肝肝癌组组织浸润淋巴细胞中CD4~+T细胞与CD8~+T细胞的比值为(0.90±0.31),显著高于乙肝癌旁组(0.45±0.10)及对照组(0.12±0.12)(P=0.003, P=0.000; P<0.05),CD4~+T细胞与CD8~+T细胞的比值出现失衡。4、乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD4~+CD45RO~+T+CM亚群占CD4~+CD45RO记忆T细胞的比例分别为(0.24±0.22)%、(0.30±0.29)%、(0.73±0.99)%,三组之间的差异没有统计学意义(P=0.267,0.361,0.913; P>0.05)。乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD4~+CD45RO~+T+EM亚群占CD4CD45RO~+记忆T细胞的比例分别为(88.80±10.79)%、(98.50±0.75)%、(95.27±5.50)%,乙肝肝癌组低于乙肝癌旁组,差异有统计学意义(P=0.05)。5、乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD8~+CD45RO~+TCM亚群占CD8~+CD45RO~+记忆T细胞的比例分别为(0.33±0.37)%、(0.27±0.17)%、(0.23±0.31)%,各组之间的差异没有统计学意义(P=0.553,0.806,0.762; P>0.05);乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD8~+CD45RO~+TEM亚群占CD8~+CD45RO~+记忆T细胞的比例为(91.36±8.02)%、(98.54±0.77)%、(98.40±1.78)%,乙肝肝癌组显著低于乙肝癌旁组及对照组,差异有统计学意义(P=0.011, P=0.005;P<0.05)。结论1、原发性肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中,CD4~+T细胞所占的比例升高,而CD8~+T细胞所占的比例下降,CD4~+T细胞与CD8~+T细胞的比值存在失衡。2、原发性肝癌患者肿瘤浸润CD45RO~+记忆T细胞中,主要以TEM为主,起主要效应功能,而TCM占很小的比例。原发性肝癌患者肝癌组织CD4~+TEM及CD8~+TEM占CD45RO~+记忆T细胞的比例显著小于非肝癌组织。
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