肿瘤生物治疗(Biotherapy)是恶性肿瘤综合治疗中重要的手段之一,它以独特的疗效和近乎不存在的毒副作用越来越受到患者和肿瘤工作者的青睐,是应用现代生物技术及其产品进行肿瘤防治的新疗法,它通过调动宿主的天然防卫机制或给予天然(或基因工程)产生的靶向性很强的物质来取得抗肿瘤的效应。肿瘤生物治疗包括体细胞疗法与细胞因子疗法、肿瘤疫苗与树突状细胞(dendriticcells,DCs)、肿瘤分子靶向治疗、放射免疫靶向治疗、肿瘤基因治疗和生物化疗等。DCs诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity t lymphocyte,CTL)是目前研究的热点之一,也是体内外实验研究证实疗效明确的生物治疗方法之一。DCs用于肿瘤治疗已进入Ⅰ和Ⅱ期临床研究,所涉及的肿瘤包括恶性黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、前列腺癌、肝癌、卵巢癌、尤文肉瘤、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、肺癌、胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌等,并且取得了令人鼓舞的疗效。　　 DCs是体内最有效的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),是识别病原侵入的第一道防线,机体的免疫识别首先由DCs捕获、加工和处理抗原,再将抗原递呈给T、B淋巴细胞,从而引发一系列免疫应答,在体内发挥强大的免疫监视功能。　　 但是以DCs为基础的肿瘤生物治疗在体外对肿瘤细胞的杀伤率相对比较低,分析可能的因为有:一、诱导获得的DCs功能活性低和/或数量少,不能有效地将抗原呈递给并激活T淋巴细胞；二、获得的CTL细胞功能活性低,细胞毒性不足以有效地杀伤肿瘤细胞；三、CTL和肿瘤细胞作用的环境中后,无具有“催化作用”的生物活性物质催化/放大这种杀伤活性。　　 设想有一些生物活性物质,可以打开诱导获取DCs的“限速闸门”而发挥生物放大效应,快速获得大量的具有免疫激活效应的DCs；设想有一些生物活性物质能在DCs和T淋巴细胞作用时发挥“催化放大”功能,高效呈递抗原,有效激活T淋巴细胞成为具有高级杀伤功能的CTL细胞；设想有一些生物活性物质能在CTL与肿瘤细胞接触的局部环境中发挥“酶促”效应,极度放大杀伤活性。　　 人体内的激素是由内分泌系统的内分泌细胞所分泌的,可传递信息的高效能生物活性物质,分为胺类、多肽与蛋白质类和脂类激素3大类,近50种之多。激素是体内的最高效能的生物活性物质,在生理状态下,血液中的激素浓度都很低,多为纳摩尔(nmol/L),甚至为皮摩尔(pmol/L)数量级,但是激素与细胞的受体结合后,可引发一系列酶促反应,并逐级扩大其后续效应,形成效能极高的生物放大系统,发挥出激素类物质的生物放大效应。本研究分为以下二部分:　　 一、在体外观察、检测了不同浓度的生长激素对DCs免疫表型和免疫功能的影响,并观察了生长激素受体拮抗剂培维索孟对生长激素修饰DCs效应的拮抗效应。　　 二、在体外观察、检测了不同浓度的胰岛素对DCs免疫表型和免疫功能的影响,并检测了胰岛素修饰下获得的DCs诱导的CTL对胰腺癌细胞株的体外杀伤活性。　　 第一部分生长激素对脐血来源树突状细胞成熟状态的影响　　 目的在体外检测生长激素(growth hormone,GH)对脐血来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)的免疫表型和功能状态的影响。　　 方法：从新鲜脐带血中分离出单核细胞,应用白细胞介素4和粒巨噬集落刺激因子诱导刺激单核细胞,不同浓度的GH做为修饰因子修饰DCs诱导过程,设立空白对照组阴性对照组(氢化可的松作为修饰因子)和阳性对照组(以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为修饰因子)；观察DCs形态、数目、生长状态,流式细胞仪检测DCs的免疫表型,ELISA方法测定DCs上清液中白细胞介素-12,自体混合淋巴细胞反应测定其功能状态；应用培维索孟作为GH拮抗剂观察拮抗后的效应。　　 结果：脐血贴壁的单核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和GH的诱导下可以分化为成熟DCs,不同浓度(5ug/L～100ug/L)GH均可显著上调DCs细胞表面HLA-DR、CD1α、CD80和CD83分子表达的阳性率(P<0.05),明显提高DCs分泌IL-12的能力(P<0.05),DCs对自体淋巴细胞的激活功能明显增强(P<0.05)；培维索孟能有效拮抗GH对DCs的上述效应。　　 结论：(1).GH可明显促进DCs的诱导过程,修饰加速DCs的成熟并提高细胞表面共刺激分子表达,增强DCs IL-12分泌和激发自身淋巴细胞增殖能力。(2).GH修饰DCs的诱导获取过程,可获得更高比例成熟型DCs细胞群,并且该DCs细胞群具有更强的免疫激活功能。(3).GH对DCs免疫特征和功能的修饰与GH的浓度有一定范围内的正相关性。(4).GH对DCs免疫特征和功能的修饰作用是可控的,可逆的,可被生长激素拮抗剂培维索孟有效拮抗。　　 第二部分胰岛素对脐血来源树突状细胞功能状态及诱导的CTL杀伤胰腺癌细胞株的影响　　 目的探讨胰岛素(insulin,In)对脐血来源树突状细胞(DCs)的免疫功能状态和DCs诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity t lymphocyte,CTL)杀伤胰腺癌细胞株活性的影响。　　 方法：从新鲜脐带血中分离出单核细胞,应用IL-4和GM-CSF诱导刺激单核细胞,不同浓度的In做为修饰因子修饰DCs诱导过程,设立空白对照组阴性对照组(氢化可的松作为修饰因子)和阳性对照组(以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为修饰因子)；观察DCs形态、数目、生长状态,流式细胞仪检测DCs的免疫表型,ELISA方法测定DCs上清液中IL-12,自体混合淋巴细胞反应测定其功能状态；In修饰后的DCs诱导T淋巴细胞成为CTL细胞,比较测定CTL对2种胰腺癌细胞株Patu-8988和AsPC-1的杀伤活性。　　 结果：脐血来源的单核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF诱导和In的修饰下成功分化成为DCs,不同浓度(2.5mg/L～25mg/L)In可显著上调DCs细胞表面HLA-DR、CD1α、CD80、CD83分子表达的阳性率(P<0.05),明显提高DCs分泌IL-12的能力(P<0.05),DCs对自体淋巴细胞的激活功能明显增强(P<0.05),经In修饰的DCs诱导出的CTL细胞杀伤胰腺癌细胞株的活性显著增强(P<0.05)。　　 结论：.(1).In可明显促进DCs的诱导过程,修饰加速DCs的成熟并提高细胞表面共刺激分子表达,增强DCs IL-12分泌和激发自身淋巴细胞增殖能力。(2).In修饰DCs的诱导获取过程,可获得更高比例成熟型DCs细胞群,并且该DCs细胞群具有更强的免疫激活功能。(3).In对DCs免疫特征和功能的修饰与GH的浓度有一定范围内的正相关性。(4).In修饰获取的DCs刺激自体淋巴细胞得到CTL,其对胰腺癌细胞株的杀伤活性明显增强,In可作为以DCs为基础的肿瘤生物治疗的备选修饰因子。