基因疫苗是近年来发展起来的新型疫苗,又叫做核酸疫苗或DNA疫苗,与常规的灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗以及重组疫苗相比,具有安全、有效、制备容易、保存运输方便等优点,因而受到广泛重视。HCA661是2002年利用SEREX法从肝细胞癌患者分离出的一种新的肝细胞癌抗原,也称为TFDP3或CT40,属于CT抗原。该基因编码的蛋白表达于肝细胞癌中,而在除睾丸外正常组织中均不表达。HCA661蛋白具有免疫原性,能够诱导抗体反应,能够引起CTL反应。mtHSP70蛋白是一种载体分子,并具有免疫佐剂的作用。其受体是CD40,在mtHSP70多肽结合区有一个刺激表位,具有7个重要的氨基酸残基Q407、P408、S409、V410、Q411、E420和H424,能显著提高HSP70或CD40L刺激的DCs成熟,增强CD40-HSP70途径中p38MAP激酶的磷酸化。为尽量减少机体产生针对mtHSP70的免疫应答,进一步优化基因佐剂,本研究构建了HCA661和mtHSP70刺激表位的融合基因疫苗pc-HCA661-mtHSP70E[o1],重组的共表达质粒已由双酶切和测序证实。将pc-HCA661-EGFP重组质粒通过体外转染NHI/3T3细胞,建立了稳定表达融合蛋白的细胞系。pCI-HCA661-mtHSP70E和pCI-HCA661-mtHSP70C(羧基端)免疫动物后,采用流式细胞术、MTT法、Western blot、ELISA、免疫组化等实验室技术,证实了pCI-HCA661-mtHSP70E比起pCI-HCA661- mtHSP70C具有更好的免疫疗效。