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目的非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌组织学亚型,占肺癌的80%左右。补体C5a的受体(C5a R)在肿瘤中的表达常与病情的严重程度和患者的预后相关,其在非小细胞肺癌组织中的表达较癌旁组织高。金黄色葡萄球菌分泌的PV-杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin,PVL)由Luk F-PV和LukS-PV双组分组成,其中LukS-PV能靶向结合C5a R,抑制白血病细胞增殖与侵袭,诱导凋亡及分化。我们推测在C5a R表达增高的非小细胞肺癌细胞中LukS-PV可能发挥相似的生物学作用。本课题从细胞的增殖,迁移,凋亡和周期多方面进行研究,探讨LukS-PV对非小细胞肺癌细胞A549、H460的作用及机制。方法(1)体外培养正常肺上皮细胞16-HBE及非小细胞肺癌细胞A549、H460,用不同浓度LukS-PV(0、0.25、0.5、0.75、1μM)刺激不同时间(0、12、24、36、48H)。(1)CCK-8试验检测LukS-PV对各组细胞活力的影响。(2)Ed U试验检测LukS-PV对A549、H460细胞增殖的影响。(2)利用Transwell试验检测LukS-PV对A549、H460细胞迁移的影响,用Western blot检测迁移相关蛋白MMP-2的表达变化。(3)采用FCM检测LukS-PV对A549、H460细胞凋亡和周期的影响,RT-q PCR检测周期相关蛋白(P21,Cyclin D1,Cyclin A2)表达,Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和周期蛋白(P21,Cyclin D1,CDK2)的表达变化。(4)利用Western blot检测MAPK信号通路中p38,ERK及磷酸化的p38,ERK表达水平。(5)用ERK抑制剂LY3214996和p38 MAPK抑制剂SB203580对癌细胞A549、H460预处理2H,再用LukS-PV刺激24H。分别分为正常对照组、LukS-PV刺激组、LukS-PV+SB203580组、LukS-PV+LY3214996组以及LukS-PV+SB203580+L Y3214996组。FCM检测各组细胞周期与凋亡情况,Western blot检测各组磷酸化的p38,ERK及细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平。结果(1)LukS-PV对非小细胞肺癌细胞的增殖具有抑制作用。(2)LukS-PV能够下调MMP-2的表达,抑制非小细胞肺癌细胞的迁移。(3)LukS-PV能够下调Bcl-2、上调Bax的表达,诱导非小细胞肺癌细胞凋亡。(4)LukS-PV可调控P21表达增高,Cyclin D1,Cyclin A2和CDK2表达降低,诱导非小细胞肺癌细胞周期阻滞在S期。(5)LukS-PV可以使磷酸化的p38,ERK表达增高,ERK抑制剂LY3214996和p38 MAPK抑制剂SB203580能在一定程度上拮抗LukS-PV所诱导的非小细胞肺癌细胞的凋亡和周期阻滞。结论(1)LukS-PV能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移,诱导癌细胞凋亡与周期阻滞。(2)LukS-PV通过p38/ERK MAPK信号通路诱导非小细胞肺癌细胞凋亡与周期阻滞。