正常成人β珠蛋白基因转染小鼠红白血病细胞MEL及其表达的检测

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目的:克隆正常成人β珠蛋白基因及其调控序列LCR,构建该基因的体外真核表达体系,为基因治疗β地中海贫血病作动物细胞实验方面的基础研究。 方法:抽提正常成人基因组DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β基因组DNA,将其串联克隆至真核稳定表达质粒pCDNA3.1(-)中,脂质体转染至小鼠红白血病细胞(MEL),DMSO诱导MEL细胞表达,RT-PCR检测正常成人β基因的在RNA水平表达。 结果:成功克隆正常成人β珠蛋白基因及其调控序列LCR并构建了含正常成人β基因的重组质粒。转染小鼠红白血病细胞后RT-PCR显示正常成人β基因在RNA水平表达。 结论:人β基因在MEL细胞中成功表达,为正常成人β珠蛋白基因转染β地中海贫血病人的干细胞以基因治疗该病提供一定的可行性依据。
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