氧化槐果碱对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

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目的:氧化槐果碱是一种从苦参中提取的有效成分,属于脱氢型苦参碱类生物碱。随着现代药理学对苦参碱类生物碱研究不断深入,有研究发现其具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤等作用。有研究证实氧化槐果碱体外实验对结肠癌SW480细胞以及乳腺癌MCF-7细胞均有抑制细胞增殖,诱导凋亡的作用。目前针对肝癌的治疗仍然缺乏有效的治疗手段,氧化槐果碱对肝癌细胞的影响还没有研究报道。本实验以氧化槐果碱和SMMC-7721细胞作为研究对象,探究:1.氧化槐果碱对细胞增殖和凋亡的影响;2.氧化槐果碱对肝癌细胞具体的作用机制,为药物的临床应用提供理论基础。方法:(1)采用浓度梯度的氧化槐果碱处理SMMC-7721细胞和L-02细胞,药物作用细胞后培养48h;采用倒置显微镜观察细胞形态变化。(2)采用CCK-8法检测不同浓度梯度的氧化槐果碱对SMMC-7721细胞和L-02细胞增殖的影响,计算出IC50后筛选出合适的药物浓度。(3)采用流式细胞术检测不同浓度的氧化槐果碱对SMMC-7721和L-02细胞凋亡的影响。(4)采用Western blot技术检测SMMC-7721细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、STAT3、STAT5表达水平差异。结果:(1)肝癌细胞处理48h后形态学改变,与对照组比较,随着氧化槐果碱2,4,8mmol/L浓度不断上升,SMMC-7721细胞增殖受到抑制,有部分细胞发生皱缩和死亡。在16mmol/L浓度条件下,显微镜视野内肝癌细胞数量较对照组显著减少,一定程度的细胞死亡。在32mmol/L浓度条件下,SMMC-7721细胞增殖明显受到抑制,绝大多数细胞发生死亡。低浓度药物作用于L-02细胞时,与对照组相比,视野内细胞数量减少不明显,而在氧化槐果碱32mmol/L浓度条件下,L-02细胞数量较对照组明显减少,细胞发生皱缩和死亡(2)CCK8法结果显示,与对照组相比,氧化槐果碱明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,且随着浓度的升高,OD值明显下降(P<0.05)。相同浓度的氧化槐果碱作用于L-02细胞时,与对照组相比,药物处理组不存在统计学差异,(P>0.05);氧化槐果碱作用肝癌细胞的IC50为5.294。(3)流式细胞术检测发现,氧化槐果碱药物处理组(2,4,8,16mmol/L)作用SMMC-7721细胞48h后,16mmol/L氧化槐果碱的细胞凋亡率明显高于其余4组凋亡率(P均<0.05);药物作用L-02细胞,与对照组相比,16mmol/L时凋亡率存在统计学差异(P<0.05),但各个浓度之间不存在统计学差异(P>0.05)。这说明当氧化槐果碱有效作用浓度诱导肝癌细胞凋亡时,对正常肝细胞的凋亡也存在一定影响。(4)Western blot法结果能够显示,氧化槐果碱药物处理组与对照组相比,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量明显减少(P<0.05),而促进凋亡的Bax表达量明显增加(P<0.05)。氧化槐果碱药物处理组的STAT3、STAT5的表达量较对照组明显下降(P<0.05)。结论:氧化槐果碱对肝癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用。这可能是通过JAK-STAT信号通路下调STAT3、STAT5蛋白激酶表达,从而上调促凋亡Bax基因表达,下调抗凋亡Bcl-2基因表达有关。
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