【摘 要】
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原始生殖细胞(PGCs)承载着物种繁衍的重责。然而由于其数量少、体外增殖困难以及伦理的限制,直接以原始生殖细胞为材料进行生物学研究也比较困难。因此,体外诱导胚胎干细胞向
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原始生殖细胞(PGCs)承载着物种繁衍的重责。然而由于其数量少、体外增殖困难以及伦理的限制,直接以原始生殖细胞为材料进行生物学研究也比较困难。因此,体外诱导胚胎干细胞向原始生殖细胞特化的体系就十分重要,尽管这方面的研究已取得较多进展,但建立一种简单易行的分化方法来作为后续研究的模型仍十分必要。本课题的目的是从人胚胎干细胞(hESCs)和小鼠胚胎干细胞(mESCs)向PGCs特化两个方面进行特化模型的建立和优化。在人胚胎干细胞方面采用单层贴壁分化方法,产生的SSEA19+细胞受到异位表达的Dazl基因.BMP4. ActivinA、 RA等的调控,且其H19-CTCF6印记位点的甲基化程度降低,说明SSEA1可以指示PGCs的形成,该“贴壁分化-SSEA1"体系可以作为hESCs向PGCs特化的模型,用来筛选PGCs特化过程中起作用的基因、细胞因子、化学小分子等。我们进一步利用该模型证明了Gasz在人类生殖细胞发育中起重要的促进作用。在小鼠胚胎干细胞方面,在实验室已建立的“EB分化-SSEA1"模式的基础上,利用报告细胞系BVSC(Blimp1-m Venus and Stella-ECFP)与多种生殖细胞特异性标记基因共同标记PGCs,出现的Blimp1+Kit+和Blimp1+CXCR4+细胞群体被异位表达的生殖细胞特异基因Dazl调节。进一步的特征研究表明Blimp1+Kit+细胞在一定程度上富集了PGCs。
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