茯苓多糖、黄芪多糖和银杏叶黄酮对猪精子冷冻保存效果的研究

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目前在国内,猪精液冷冻保存技术的推广和应用进展缓慢,主要由于猪精子冷冻后的活率及人工授精繁殖率不够理想。为了进一步的提高猪精液冷冻-解冻后的品质和精子抗低温打击损伤的能力,本试验以茯苓多糖、黄芪多糖和银杏叶黄酮作为冷冻保护添加剂,采用碘化丙啶(PI)、罗丹明123、低渗肿胀试验(HOST)和异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(PITC-PNA)来分别检测猪精子的活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率,评价三种冷冻保护剂对猪精液品质的保护作用。同时,测定了茯苓多糖、黄芪多糖和银杏叶黄酮对猪精子冷冻—解冻前后的SOD、LDH和GOT酶的活性的影响,获得了如下结果:1.猪精液在冷冻过程中,以传统的冷冻稀释液TCG的基础上,分别添加0.06mg/mL的茯苓多糖、0.04mg/mL的黄芪多糖和0.08mg/mL的银杏叶黄酮都可以提高猪精子的冻后的活率、质膜的完整率、顶体的完整率及线粒体的活性,与对照组比较差异显著(P<0.05)。三种冷冻保护剂相互比较,0.06mg/mL茯苓多糖的保护效果较好,与对照组比较,精子活率提高了50.15%,顶体完整率提高了66.41%,质膜完整性提高了21.27%,线粒体活性提高了10.93%。2.选用不同浓度的茯苓多糖、黄芪多糖和银杏叶黄酮分别与不同浓度的甘油进行两因子变量间的交叉设计,其中0.06mg/mL茯苓多糖和2.4%的甘油配合后猪精子的活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体的完整率最好,与对照组比较差异显著(P<0.05),与当甘油添加量为3%的试验组比较差异不显著(P>0.05),结果表明糖类与甘油互作能够有效提高猪精子冻后品质,茯苓多糖的适量添加可以有效降低甘油的添加量,却不能完全替代甘油用作抗冻保护剂来使用,较好的方法是与甘油共同作用来保护猪精子。3.在平衡后及冷冻—解冻后,猪精子内的超氧化物歧化酶(SOD)的活性有所下降,而乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸转氨酶(GOT)在冷冻过程中是逐渐升高的;添加冷冻保护剂后,猪精子SOD酶活力有所提高,其中0.06mg/mL茯苓多糖对超氧化物歧化酶(SOD)的保护作用最好,平衡后活性达105.26u/mL,冷冻后活性为81.04u/mL。添加冷冻剂后,GOT和LDH的活性较对照组没有明显提高。
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