论文部分内容阅读
全氟十二羧酸(PFDoA)是一种新型持久性有机污染物(POPs)。PFDoA已经在各种环境介质、野生动物和人体内被广泛检出。由于该类物质具有稳定的C-F共价键,难以被生物降解,对生态环境安全和人类健康构成了威胁,但有关PFDoA肝脏毒性的分子机制还不清楚。本研究通过高效液相色谱/电喷雾负离子源串联质谱法(HPLC/negative ESI/MS/MS),检测了PFDoA在亚慢性暴露110 d后雄性大鼠肝脏中的蓄积量；并通过体内和体外实验,应用实时荧光定量PCR (Polymerase chain reaction,聚合酶链反应)、Western blot和RNA干扰技术,探讨PFDoA是否通过PPAR途径或其他可能途径影响肝脏脂肪酸氧化,并筛选对PFDoA敏感的生物标志物,从而深入了解PFDoA对肝脏脂肪酸氧化的影响机制。本文得到以下主要结果：1、亚慢性暴露110 d, PFDoA可以在雄性大鼠肝脏中蓄积,且蓄积量随暴露浓度增大而升高,其中,高剂量组肝脏累积PFDoA是对照组的583.5倍。2、体内实验表明：PFDoA亚慢性暴露雄性大鼠,其肝脏过氧化物酶体增殖剂受体PPARα、PPARγ及其下游脂肪酸氧化相关的靶基因如Acox、Cpt1、Cyp4a1、Cte1、Mte1表达均显著上调,其中Mte1和Cte1 mRNA水平分别升高数十倍和数千倍,且都具有明显的剂量效应关系。3、体外实验中,75μM PFDoA处理原代大鼠肝细胞24 h后,可显著诱导上述所有基因的表达,其中Cte1和Cyp4a1分别被诱导升高数百倍和数千倍；75μM PFDoA对相关基因的诱导作用与50μM的PPARα激动剂WY-14643(阳性对照)相似；而大鼠肝细胞株BRL细胞对PFDoA相对不敏感。原代肝细胞PPAR的RNA干扰实验尚在进行中,如果PPAR沉默后PFDoA仍能够诱导脂肪酸氧化相关基因的表达,则表明PFDoA可以通过PPAR通路以外的途径干扰大鼠肝脏的脂肪酸氧化。本文通过体内和体外实验均证明PFDoA可以通过PPAR途径干扰雄性大鼠肝脏脂肪酸氧化,并研究可能存在的其他途径以探讨PFDoA的肝毒性机制。另外,Mte1、Cyp4a1和Cte1均对PFDoA的作用高度敏感,特别是Cte1,可以作为PFDoA毒性作用的生物标志物。