【目的】 探讨丹参骨宝 2 号(丹参水溶性有效部位群，salvia miltiorrhiza active aqueous extract，DUAE)的制备工艺，质量控制及体内体外抗骨质疏松作用研究。 【方法】 1、丹参骨宝2号制备工艺的研究： 丹参骨宝2号的制备工艺以丹参素含量最高为标准。结合高效液相(HPLC)法含量测定，经过多次正交试验比较不同浓度、不同种类的酸或碱，温度，提取时间等外加因素对丹参水溶性有效部位群中有效成分丹参素，丹酚酸 B，原儿茶醛含量的影响，得出九种丹参的水溶性有效部位群的提取物(命名为1-9号)，然后以丹参素含量最高者定为丹参骨宝2号。 2、丹参骨宝2号制备工艺的质量控制： 采用符合2005版中国药典一部规定的丹参药材标准以丹参素、丹酚酸 B、原儿茶醛为对照，建立高效液相(HPLC)的定量分析方法，用于丹参骨宝2号制备工艺的质量标准的控制。 3、丹参骨宝2号对体外成骨细胞活性试验评价： 采用酶序列消化分离培养法培养新生大鼠颅骨成骨细胞。应用碱性磷酸酶染色法、茜红素染色法等方法鉴定成骨细胞，评价丹参骨宝2号与不同制备工艺制得的DUAE对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的ALP含量、骨钙素含量的影响。体外成骨细胞实验分组如下，0组：空白对照组，加入不含血清的DMEM对照。1组：加入1号制备工艺制得的DUAE，2组：加入2号，3组：加入3号，4组：加入4号，5组：加入5号，6组：加入6号，7组：加入7号，8组：加入8号，9组：加入9号，10组：加入丹参素标准品终浓度分别为2×10<-2>mg/L，4.05×10<-2>mg/L，8.1×10<-2>mg/L，1.62×10<-1>mg/L，3.24×10<-3>mg/L。11组：加入丹酚酸B标准品终浓度分别为2.25×10<-2>mg/L，4.5×10<-2>mg/L，8.98×10<-2>mg/L，1.8×10<-1>mg/L，3.6×10<-1>mg/L。12组加入原儿茶醛标准品终浓度分别为2.16×10<-3>mg/L，4.32×10<-3>mg/L，8.63×10<-3>mg/L，1.73×10<-2>mg/L，3.45×10<-2>mg/L。13组加入复方丹参片。 4、丹参骨宝2号对糖皮质激素导致大鼠骨质疏松作用评价： 用糖皮质激素导致SD大鼠骨质疏松模型，评价丹参骨宝2号抗骨质疏松作用。实验采用4月龄清洁级雄性SD大鼠40只，随机分成5组。空白对照组(蒸馏水 0.5 ml·kg<-1>·d<-1>)、泼尼松组(3.5mg·kg<-1>·d<-1>)、丹参骨宝2号中剂量组、丹参骨宝2号低剂量组、丹参骨宝1号组，均灌胃给药，每天一次，连续90天。大鼠处死后取左侧股骨上段进行不脱钙骨组织形态计量学测量分析．右侧股骨作生物力学性能(最大载荷、最大位移、最大能量吸收、最大应力、最大应变和弹性模量)的测定。 【结果】 1、丹参骨宝2号制备工艺： 丹参骨宝2号的制备工艺确定为以盐酸前处理的提取方法，该制备方法显著提高了丹参水溶性成分，丹参素、原儿茶醛的含量，且丹参素与丹酚酸 B 的比例为1∶l。丹参骨宝2号制备方法与传统水提(丹参骨宝1号)制备方法比较，丹参素含量提高4.69倍，达11.2mg/g(生药)，丹酚酸B含量减半，减为12.8mg/g(生药)且两者含量均在1％以上，原儿茶醛含量加至0.26mg/g(尘药)。 2、丹参骨宝2号制备工艺的质量控制： 本研究以丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛为标准对照建立高效液相(HPLC)的定量分析方法，同时也初步建立了丹参骨宝2号的指纹图谱(结果参见32页，33页图3.4)。 3、体外成骨细胞试验评价丹参骨宝2号制备工艺： 通过体外成骨细胞试验对丹参骨宝及不同制各工艺制备的丹参水溶性有效部位群进行了观察，发现丹参骨宝2号制备方法可以显著提高对大鼠成骨细胞活性。丹参骨宝2号制备方法与丹参骨宝1号制备方法比较，丹参骨宝1号药量为1 mg(生药)/L 时仅提高成骨细胞 ALP 活性 5.5％(p>0.05)。丹参骨宝2号药量为0.25 mg(生药)/L时提高成骨细胞ALP活性达52％(p<0.05)。 4、丹参骨宝2号对糖皮质激素致大鼠骨质疏松作用评价： 丹参骨宝2号和丹参骨宝1号应用于糖皮质激素所致的大鼠骨质疏松试验发现：两者均有防治糖皮质激素导致的大鼠骨质疏松的作用。与模型组比较，丹参骨宝2号能增加骨小梁百分数97.6％(P<0.01)，骨小梁厚度 39.2％(P<0.01)，骨小梁数量 43.8％(P<0.01)，降低骨小梁分离度 34.2％，(P<0.01)；丹参骨宝1 号增加骨小梁百分数 98.8％(P<0.01)，骨小梁厚度 35.9％(P<0.01)，骨小梁数量 46.1％(P<0.01)，降低骨小梁分离度 38.3％(P<0.01)。两者都可以使大鼠的骨量增加、骨小梁密度升高而分离度降低。GC对大鼠7项骨生物力学指标有下降趋势(P>0.05)，丹参骨宝1号对GC导致大鼠骨生物力学指标：断裂应力，弹性模量，弹性应力，最大应力的下降趋势有微弱的提高作用(P>0.05)，丹参骨宝2号对本次试验检测的7个骨生物力学指标均有微弱的提高作用(P>0.05)。 【结论】 用盐酸前处理方法得到的丹参骨宝2号的制备工艺与传统水提法得到的丹参骨宝1号比较，丹参骨宝2号的丹参素含量提高4.69倍，达11.2 mg/g(生药)，丹酚酸B含量减半，减为12.8 mg/g(生药)且两者含量均在1％以上，原儿茶醛含量加至0.26mg/g(生药)。并且该方法，成分含量稳定质量可控。 体外成骨细胞活性测定方法发现，丹参骨宝2号对促进成骨细胞ALP活性、分泌骨钙素水平的影响优于丹参骨宝1号，说明对OB有促进作用的有效成分主要是丹参素以及适当丹参素/丹酸酚B的比例；探讨了通过不同含量的DUAE对OB的ALP水平的影响筛选出抗骨质疏松作用最佳的药物的方法。 丹参骨宝2号和丹参骨宝1号应用于糖皮质激素所致的大鼠骨质疏松试验发现：两者均有防治糖皮质激素导致的大鼠骨质疏松的作用，丹参骨宝2号优于丹参骨宝1号。两者均有骨量增加、骨小梁密度升高而分离度降低作用，由于丹参骨宝2号低剂量组所用生药丹参的量为丹参骨宝1号的1/3，显示丹参骨宝2号优于丹参骨宝1号。丹参骨宝1号对GC导致大鼠骨生物力学指标：断裂应力，弹性模量，弹性应力，最大应力的下降趋势有微弱的提高作用，丹参骨宝2号对本次试验检测的7个骨生物力学指标均有微弱的提高作用，提示丹参骨宝2号对大鼠股骨生物力学性能影响可能比丹参骨宝1号更为全面。