单糖的摄取和运输的关键场所是小肠,这主要体现在小肠绒毛中的上皮细胞上,上皮细胞含有单糖转运载体。USF1是公认的具有调节葡萄糖和脂质的转录因子,并且在小肠组织中有发现。在鸡小肠中,一般通过SGLT1、GLUT2、GLUT5表达的三种载体转运小肠中的葡萄糖和果糖。如果可以找到USF1在SGLT1、GLUT2、GLUT5基因上游的结合位点,则可以给USF1调控糖转运基因方面提供有力依据。本研究通过原代培养鸡小肠上皮细胞,对培养完成的细胞进行形态学鉴定和免疫组化鉴定;抽提上皮细胞,得到细胞总蛋白与细胞核蛋白,对抽提得到的总蛋白进行蛋白Western-blot鉴定;通过ModuleMasterl.4和TF bind等预测软件预测到的转录因子结合位点的核酸序列,并对预测得到的核酸序列进行生物素标记;将提取到的细胞核蛋白与事先标记好的生物素核酸探针进行EMSA实验,分析曝光得到的检测结果,得出转录因子USF1在三个糖转运基因上是否有结合位点以及结合位点的序列。经过一系列的试验得到如下结果:(1)经过细胞形态学鉴定,所培养的细胞首先出现不规则多边形的“铺路石”结构,经过6～7d的培养,这种多边形变成类似蝌蚪型的爆发式增长;经过免疫组化鉴定细胞中特异性抗原角蛋白18,显示,试验组的孔中细胞的颜色变成棕黄色。(2)对抽提得到的细胞总蛋白进行Western-blot鉴定,得到的曝光结果中在43kD位置出现了特异性的条带,并且条带清晰。(3)对预测出的核酸序列进行生物标记后,检测其信号强度,均有信号。(4)对提取出的细胞核蛋白与生物素标记好的核酸探针进行EMSA试验,观察曝光结果,发现在细胞核蛋白与GLUT2基因上游的预测探针中2出现滞后条带,并且出现超迁移现象;在细胞核蛋白与SGLT1基因上游的预测探针中S5出现滞后和超迁移现象;其他均无滞后条带。通过以上试验得出以下结论:(1)利用组织块法培养出来的原代细胞为鸡小肠上皮细胞;(2)提取出的细胞总蛋白中确实含有转录因子USF1,且蛋白浓度较高;(3)USF1在GLUT2基因上游有结合位点,且其位点为5’-GCAGCAGCACCTGTTGGCATGTGGGGTTCC-3’；在 GZUT5 基因上游无结合位点；在 SGLT 上游有结合位点,为 5’-TACATCTCACCTGCCAGGAT-3’。