胚胎停育绒毛组织中DNA甲基转移酶的表达及临床意义

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目的:1.检测胚胎停育患者和正常早孕者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L m RNA及蛋白的表达量及阳性染色定位;2.分析胚胎停育患者和正常早孕者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L在m RNA水平及蛋白水平的表达差异并探讨其临床意义。方法:随机选取2013年1月至2014年6月在青岛市市立医院妇产科门诊就诊的经B型超声(B超)证实为胚胎停止发育实行清宫术的40例患者为观察组,并选择同时期40例正常早孕而要求终止妊娠者作为对照组,获取两组患者绒毛组织进行研究。1.采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)法检测两组患者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L m RNA的相对表达量。2.用免疫组织化学中链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)确定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L蛋白在两组绒毛组织滋养细胞中的染色定位,并用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0检测4种蛋白在绒毛组织中的表达量。3.用Western Blot方法进一步检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L蛋白在两组患者绒毛组织中的表达。4.应用SPSS17.0软件对RT-qPCR、免疫组织化学及Western Blot所得实验结果进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1.两组绒毛组织均表达DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L,此外,无论在mRNA水平或蛋白水平,DNMT3B表达量都显著高于其他三种DNMTs。2.在m RNA水平,与对照组相比,胚胎停育患者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L的表达量均无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。3.在蛋白水平,免疫组织化学染色结果显示,在两组绒毛组织中,四种DNMTs均呈不同程度阳性染色,DNMT1与DNMT3L阳性染色定位在绒毛滋养层细胞的细胞质,DNMT3A与DNMT3B阳性染色定位在细胞核。此外,通过图像分析软件及Western Blot结果显示,胚胎停育患者绒毛中的DNMT3A蛋白的表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L四种蛋白之间表达量无明显关联(P>0.05)。结论:1.胚胎停育绒毛组织中DNMT3A蛋白的低表达可能参与胚胎停育的发病机制。2.通过检测胚胎停育患者绒毛组织中DNMTs的表达量可能为临床进行早期干预和治疗提供新的途径。
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