【摘 要】
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目的:研究针汉黄芩素对类风湿关节炎大鼠成纤维细胞样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应的影响;并基于胆碱能抗炎通路探索其作用机制。方法:以胶原诱导关节炎大鼠（CIA）成纤维样滑膜细胞（FLS）细胞系为研究对象,37℃5%CO2湿化培养箱中培养,待细胞传至4-5代进行实验;实验分组:对照组;0.1%二甲亚砜（DMSO）组;不同浓度的汉黄芩素干预组（50、100、200、400μΜ）。主要实验方法包括C
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目的:研究针汉黄芩素对类风湿关节炎大鼠成纤维细胞样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应的影响;并基于胆碱能抗炎通路探索其作用机制。方法:以胶原诱导关节炎大鼠（CIA）成纤维样滑膜细胞（FLS）细胞系为研究对象,37℃5%CO2湿化培养箱中培养,待细胞传至4-5代进行实验;实验分组:对照组;0.1%二甲亚砜（DMSO）组;不同浓度的汉黄芩素干预组（50、100、200、400μΜ）。主要实验方法包括CCK-8法检测细胞活力、Annexin-V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡情况、Ed U实验检测细胞增殖能力、Transwell法检测FLS迁移及侵袭能力、ELISA检测细胞培养上清中炎症因子IL-1、IL-6及TNF-α水平、q RT-PCR和Western Blot（WB）检测FLS中胆碱能抗炎通路相关基因及蛋白表达情况。结果:1.汉黄芩素可以抑制CIA-FLS细胞活性,且该作用呈剂量依赖性。与对照组相比,100μΜ、200μΜ和400μΜ汉黄芩素组可显著降低细胞活力（P＜0.05）,而50μΜ组和DMSO组对细胞活力无影响（P＞0.05）。流式细胞术结果显示与对照组相比,100μΜ和400μΜ的汉黄芩素可以诱导FLS细胞凋亡,但50μΜ组细胞凋亡减少同样具有统计学意义（P＜0.05）。Ed U实验结果显示,四组不同药物剂量均能显著抑制细胞增殖（P＜0.05）,其中以100μΜ组效果最为显著（P＜0.01）。2.汉黄芩素能够抑制FLS迁移及侵袭。与对照组相比,四组不同浓度的汉黄芩素干预后,迁移和侵袭的细胞数量显著减少（P＜0.05）,其中100μΜ和200μΜ组抑制效果极为显著（P＜0.001）。3.ELISA结果显示汉黄芩素可以降低FLS培养上清中IL-1、IL-6和TNF-α的水平（P＜0.05）,进而缓解类风湿关节炎时的炎症反应强度。4.汉黄芩素可以激活RA-FLS中胆碱能抗炎通路。q RT-PCR和WB结果表明,汉黄芩素可显著增加FLS中胆碱能抗炎通路核心受体α7n ACh R和其编码基因CHRNA7的表达（P＜0.01）;且随着汉黄芩素浓度的增加,NFκΒp65的表达量下降约30%;而IκΒα的表达则呈现相反趋势;该药物亦可降低HMGB1表达水平,但对ΗΜGB1基因表达无明显影响。结论:汉黄芩素可有效抑制RA-FLS的增殖、迁移和侵袭,减轻细胞的炎症反应,且这些作用可能与胆碱能抗炎通路的激活有关,提示汉黄芩素可能是一种有效的RA治疗药物。
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