目的与背景结直肠癌(colorectal cancer, CRC),是最常见的恶性肿瘤之一。2011年美国《临床医师癌症杂志》公布癌症统计数据显示,2008年预计美国新发结直肠癌141,120例,死亡49,380例,其发病率和死亡率均居恶性肿瘤第三位,占消化系统肿瘤首位。在我国,结直肠癌发病率呈逐年上升趋势,发病率和死亡率分别位列癌症第4位和第5位；在北京上海等城市,结直肠癌的发病率已跃居第2或3位。目前临床上治疗结直肠癌手段包括手术切除、放化疗、辅助放化疗、分子靶向治疗等,但多数患者就医时已为晚期,5年生存率较低,疗效不佳。已知结直肠癌的发生发展涉及多基因改变和多阶段致癌的复杂过程,信号转导异常在此过程中占主要地位,因此针对胞内信号转导蛋白进行靶向治疗已经成为抗癌治疗的一个研究热点。APPL1 (adaptor protein containing PH domain, PTB domain and leucine zipper motif)又称DIP13a,是99年由Yasuhiro Mitsuuch等人利用酵母双杂交技术发现与AKT2相互作用的一种胞内衔接蛋白,包括BAR、PH和PTB三个多功能结构域。APPL1利用不同结构域与多种膜受体和胞内信号分子相互作用,参与胞内多条信号通路的传导,在细胞存活、生长、增殖以及凋亡等过程中发挥重要作用。研究发现,APPL1在结肠癌、前列腺癌、卵巢癌等细胞株中均有表达,但发挥的作用并不相同,是促癌基因还是抑癌基因尚无定论,作用机制也并不清楚。目前尚无实验证实APPL1在人结肠癌组织中的表达情况,因此本研究通过检测APPL1蛋白在结直肠癌及正常组织中的表达情况,分析APPL1与结直肠癌临床病理参数的关系,初步探讨APPL1蛋白在结直肠癌发生发展中潜在作用以及可能作用机制。材料与方法1资料收集郑州大学第一附属医院2011-03/12期间手术切除并经病理证实为结直肠癌组织标本35例,其中结肠癌18例,直肠癌17例；男25例,女10例,平均年龄57.8岁±11.9岁(39岁-82岁)；按组织学类型划分：管状腺癌27例、乳头状腺癌3例、黏液腺癌3例、印戒细胞癌2例,按分化程度划分：高分化4例、中分化23例、低分化8例；按照2002年UICC第六版TNM的分期标准划分：Ⅰ期8例、Ⅱ期22例、Ⅲ期5例、Ⅳ期0例；淋巴结转移7例,无淋巴结转移28例,同时选取27例痔疮患者的正常直肠黏膜组织标本作为正常对照组,平均年龄42.0岁±8.7岁(26-57岁)。所有标本一分为二,一组经4%甲醛液固定、石蜡包埋,4μm连续切片后用于免疫组化,另一组于术后30分钟内取出投入液氮中用于RT-PCR检测。所有患者术前均未接受放疗、化疗及靶向治疗。2主要试剂：兔抗人APPL1多克隆抗体购自BBI公司,SP免疫组化试剂盒购于invitrogen公司,DAB显色试剂盒购自北京中衫公司,RNA柱式抽提试剂盒购自BBI公司,逆转录试剂盒来自Fermentas公司。3引物APPL1基因引物(350bp)：上游5’-CATCCAGAAAGAAACAACACCA-3’;下游5’-CATTAAGGTATCCAGCCTTTCG-3’;β-actin基因引物(205bp)：上游5’-TGACGTGGACATCCGCAAAG;下游5’-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3’。引物均由上海生工生物工程有限公司设计合成。4方法4.1免疫组织化学染色：采用S-P法,APPL1抗体与原液按照1：100比例稀释。阴性对照采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。4.2逆转录聚合酶链式反应RT-PCR:首先,采用RNA动物组织柱式一步提取法,提取结直肠癌组织及正常直肠黏膜组织的总RNA；其次,按照Fermentas逆转录试剂盒说明书进行逆转录反应以及聚合酶链反应。5统计处理：采用SPSS17.0统计软件进行数据处理,以秩和检验以及独立样本t检验进行数据分析,检验水准a=0.05。结果1免疫组化结果显示：APPL1蛋白在结直肠癌组织和正常组织中均有表达,主要定位于细胞质中,呈淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒状。APPL1蛋白在结直肠癌组和正常组织中的阳性表达率(包括阳性和强阳性)分别是88.7%(30/35)和51.8%(14/27), APPL1蛋白在两组间的表达差异具有统计学意义(P<0.01)。2 APPL1蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系：APPL1蛋白的表达阳性率与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移情况以及TNM分期具有相关性(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无明显相关性(P>0.05)。3 RT-PCR结果显示：APPL1 m RNA在结直肠癌组织和正常组织中均有表达,且在癌组织中相对表达量高于正常组织,两组间的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论APPL1蛋白在结直肠癌组织中的表达上调,且该蛋白表达与患者肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况以及TNM分期具有相关性,因此,APPL1有可能成一个结直肠癌治疗的潜在靶点。