【摘 要】
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真菌病毒（Fungal virus或mycovirus）是一种可以侵染真菌并能自我复制的一种病毒,且在高等和低等真菌中普遍存在。球孢白僵菌（Beauveria bassiana）属于高等真菌子囊菌中常见种类,已广泛用于害虫的生物防治中。本研究对50株球孢白僵菌进行了ds RNA提取,并利用高通量测序技术和RLM-RACE的进一步研究球孢白僵菌病毒的多样性和病毒的序列特征,最后通过单孢脱毒和生物学性
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真菌病毒（Fungal virus或mycovirus）是一种可以侵染真菌并能自我复制的一种病毒,且在高等和低等真菌中普遍存在。球孢白僵菌（Beauveria bassiana）属于高等真菌子囊菌中常见种类,已广泛用于害虫的生物防治中。本研究对50株球孢白僵菌进行了ds RNA提取,并利用高通量测序技术和RLM-RACE的进一步研究球孢白僵菌病毒的多样性和病毒的序列特征,最后通过单孢脱毒和生物学性状测定,研究了病毒对其寄主表型的影响。具体结果如下:1)从本实验室菌种库中随机挑选50株球孢白僵菌菌株,通过用纤维素CF-11的方法筛选,其中有15株菌株中含有真菌病毒,带毒率达30%。说明球孢白僵菌病毒是普遍存在的,且具有较高的多样性。2)我们选取其中3株菌株进行高通量测序,结果发现:RCEF5853中共含有4种病毒,分别是Beauveria bassiana Partitivirus 3（Bb PV-3）、Beauveria bassiana mycovirus ds RNA1（Bb ds R1）、Beauveria bassiana Victorivirus1（BbVV-1）和Beauveria bassiana Chrysovirus 1（Bb CV1）,其中Bb PV-3和Bb ds R1是未被报道的新病毒。其中Bb PV-3由两条ds RNA片段组成,大小分别为1856 bp和1719bp,分别编码RNA依赖的RNA聚合酶（Rd RP）和外壳蛋白（CP）。Bb ds R1是由两条ds RNA片段组成,大小均为2 kb左右,分别编码Rd RP和CP;RCEF1446菌株中共含有三种病毒,分别是Beauveria bassiana mycovirus bipartitate 1（Bb BMV-1）、Beauveria bassiana Victorivirus1（Bb VV-1）和Beauveria bassiana polymycovirus 1（Bb Pm V-1）,其中Bb BMV-1是未曾报道的新病毒,该病毒由大小分别为2026 bp和1810 bp的两条ds RNA片段组成,分别编码Rd RP和CP;RCEF4054中仅含有一种未曾报道的多聚病毒Beauveria bassiana polymycovirus 4（Bb Pm V-4）,该病毒共有8条ds RNA片段,较长的片段编码Rd RP,其他片段分别编码一个假定蛋白。其中Bb PV-3、Bb BMV-1和Bb Pm V-4通过RLM-RACE方法测定出这3个病毒每条ds RNA片段5’和3’端的完整序列。3)用单孢分离的方法获得菌株RCEF4054的脱毒菌株,通过对其生物学性状研究,结果表明:脱毒菌株与带毒菌株相比,在SDAY、1/4SDAY和PDA上生长速率及菌落形态无显著差异;但产孢量减少52.3%;在含SDS的培养基上较敏感,相对抑制率增加了10%;两种菌株的萌发中时具有显著差异,带毒菌株的萌发中时为12.6 h,脱毒菌株的萌发中时为9.5 h;脱毒菌株对紫外照射和热激处理均较为敏感;重要的是,通过注射和体表两种毒力生物测定实验,我们可以判断病毒通过增加白僵菌的壁侵染能力来增强其杀虫能力。综上所述,所选三株球孢白僵菌菌株共含有8种真菌病毒,其中有4种病毒可能是新种,说明球孢白僵菌病毒多样性较高。其中多聚病毒Bb Pm V-4不仅降低球孢白僵菌的产孢量,还增加了其抗紫外和耐热能力,更重要的是还显著增强了其杀虫的能力。
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