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目的:构建真核表达质粒pEGFP-C2-hPOT1。方法:采用TRIzol从慢性粒细胞白血病K562细胞中提取总RNA,并将总RNA逆转录成cDNA后采用高保真的Taq酶对hPOT1进行扩增,随后将扩增产物插入真核表达载体pEGFP-C2,构建真核表达质粒pEGFP-C2-hPOT1,转化大肠杆菌,采用基因测序等方法鉴定pEGFP-C2-hPOT1。结果:真核表达质粒pEGFP-C2-hPOT1经测序确认未发生碱基突变与移码,且与GeneBank中hPOT1的参考序列（NM015450.2）完全匹配。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C2-hPOT1目的:研究HEp-2细胞hPOT1高表达对P21Waf1/Cip1表达水平的影响及其可能的机制。方法:①实时荧光定量PCR分别检测实验组（HEp-2细胞转染pEGFP-C2-hPOT1）和对照组（HEp-2细胞转染pEGFP-C2）hPOT1 mRNA和P21 mRNA的水平;②激光共聚焦显微镜检测GFP-hPOT1融合蛋白及MDM2在HEp-2细胞中的定位;③Western blot检测实验组和对照组中GFP-hPOT1融合蛋白、MDM2、P53、P21Waf1/Cip1等蛋白的表达水平。结果:①当使用4μg质粒转染HEp-2细胞24hr和48hr时,实验组hPOT1 mRNA水平分别为对照组的92233.29和25870.14倍,且仅有98KD大小的GFP-hPOT1融合蛋白的表达,而对照组表达27KD大小的GFP蛋白;②HEp-2细胞中的GFP-hPOT1融合蛋白主要定位于细胞核中,但细胞浆中也存在少量的GFP-hPOT1融合蛋白;③实验组与对照组中P21 mRNA的水平差异不明显,但实验组中P21Waf1/Cip1的水平显著高于对照组,且随着pEGFP-C2-hPOT1转染量的增加,GFP-hPOT1融合蛋白的表达量不断增加,P21Waf1/Cip1的表达量随着GFP-hPOT1融合蛋白的增加而不断上调;④实验组MDM2表达水平明显高于对照组,但两组间P53水平变化不明显;⑤实验组GFP- hPOT1融合蛋白与MDM2能够共同定位于同一位点。结论:HEp-2细胞中hPOT1的高表达导致P21Waf1/Cip1的表达水平上调,并且呈现对GFP-hPOT1融合蛋白的剂量依赖性;同时在HEp-2细胞中hPOT1能够与MDM2共同定位于同一位点;hPOT1的高表达致P21Waf1/Cip1表达水平的上调不是通过增加P21 mRNA的水平、而可能是通过抑制MDM2的E3连接酶活性从而抑制蛋白酶体降解P21Waf1/Cip1所致。