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目的:通过使用氟波脂(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)、重组人白细胞介素4(Recombinant Human Interleukin-4,IL-4)刺激人单核白血病THP-1细胞株,获得M2型巨噬细胞。然后分别在缺氧和常氧条件下,对M2型巨噬细胞和人结肠癌HCT-116细胞进行共培养。观察缺氧对肿瘤相关巨噬细胞自噬及细胞因子表达的影响。方法:1.用PMA刺激诱导人单核白血病THP-1细胞分化为巨噬细胞,再通过IL-4刺激巨噬细胞分化为M2型巨噬细胞。2.构建transwell非接触共培养体系,分别在常氧和缺氧条件下对M2型巨噬细胞单独培养及与HCT-116细胞进行共培养24h、48h。3.实验分组:将M2型巨噬细胞常氧条件单独培养24h、48h两组作为对照组,再设缺氧单独培养24h、48h,常氧共培养24h、48h及缺氧共培养24h、48h共计六个实验组。4.分别收集不同培养条件和不同培养时间的M2型巨噬细胞,提取蛋白,western-blot检测各组标本中的自噬特异性蛋白beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3, LC-3)的表达。收集各组细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附试验检测上清液中的白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素(Interleukin-12,IL-12)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrotic factor-α,TNF-α)的表达。结果:1.成功诱导THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞,经流式细胞仪检测细胞CD68分子表达率为86.35%。2.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoabsorbentassay,ELISA)检测IL-1β实验各组中常氧共培养组(24h、48h)、缺氧单独培养组(24h、48h)与对照组(24h、48h)差异无统计学意义(P>0.05),缺氧共培养组24h:0.7900±2.65%,48h:0.7433±4.16%分别与对照组24h:0.8717±5.11%,48h:0.8733±3.21%比较差异有统计学意义(P<0.05),缺氧共培养组24h、48h IL-1β表达均下调。实验组各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。IL-12和TNF-α的实验各组与对照组比较差异无统计学意义。IL-12和TNF-α表达在缺氧及共培养作用下无明显变化。通过测量LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的灰度值比值,常氧各组之间无统计学差异(P>0.05)。缺氧各组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值:缺氧单独培养24h、48h,缺氧共培养24h、48h分别为0.3714±5.49%、1.0706±8.00%、0.4203±5.07%、1.1377±6.18与对照组24h、48h的比值0.2590±0.78%、0.2617±0.82%比较差异显著,有统计学意义(P<0.05)并与缺氧时间正相关。Beclin1蛋白表达在常氧各组内参灰度值比值差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧各组Beclin1表达相对值即Beclin1/β-actin的灰度值比值:缺氧单独培养24h、48h,缺氧共培养24h、48h分别为0.4385±2.04%、0.6451±3.96%、0.6871±2.21%、8235±7.70%与对照组24h、48h的灰度值比值0.2876±0.67%、0.2856±1.42%比较差异显著,有统计学意义(P<0.05),差异与缺氧时间正相关。结论:1、人单核白血病THP-1细胞株在氟波脂及重组人白细胞介素4诱导下可获得M2型巨噬细胞。2、M2型巨噬细胞在缺氧条件下自噬水平显著上调。3、M2型巨噬细胞在缺氧条件下与结肠癌细胞共培养时其IL-1β分泌显著下调,而IL-12和TNF-α分泌则无明显影响。