深绿木霉T2蛋白TraT2A诱导抗病活性及其机理研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sangjianfei1
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本研究以来源于深绿木霉T2发酵液的蛋白质提取物TraT2A为试验材料,采用室内离体、活体生物测定和RT-qPCR方法,研究了环境因素对TraT2A活性影响,明确了TraT2A的抑菌活性及诱导抗病活性、优化了TraT2A诱导抗病条件,初步探明了其诱导抗病机理,研究结果对指导TraT2A蛋白在生物防治领域的应用和制剂化研究具有重要意义。主要研究结果如下:1.不同环境因素对TraT2A活性影响结果表明:(1)TraT2A蛋白在不同浓度、温度、pH条件下均具有活性,其中浓度为1×104μg/mL、温度为25℃、pH=8时活性最高,引起过敏斑直径最大,分别为8.00 mm、15.00 mm和15.00 mm;(2)TraT2A诱导抗病活性与处理TraT2A的温度、pH、光照时间和紫外照射时间等因素相关,当25℃水浴热激TraT2A 15 min、TraT2A分别用白炽灯、紫外灯照射60 min、调节pH=8时,TraT2A诱导抗病效果最好,诱导抗病率分别为72.15%、81.05%、85.07%和82.77%。2.TraT2A对10种病原菌抑菌活性和诱导抗病活性测定结果表明:TraT2A对10种病原菌抑菌活性均低于其诱导抗病活性,其中1×104μg/mL TraT2A对兰州百合灰霉病的诱抗效果最好,诱导抗病效果为58.23%,抑菌率为0.49%。3.TraT2A诱导百合抗灰霉病条件优化结果表明:(1)TraT2A最佳诱导条件为:1×104μg/mL TraT2A,喷雾诱导处理2次,48 h后挑战接种病原菌,其诱导抗病效果为70.30%,比诱导处理1次的诱导抗病效果提高了18.06%;(2)经TraT2A最佳诱导条件诱导处理的百合幼苗,分别在光照60 min、紫外照射20 min、30℃条件下其诱导抗病效果最好,分别为91.10%、94.26%和90.12%,与无光照、无紫外照射、25℃条件下的处理相比分别提高了21.25%、22.68%和19.48%。4.TraT2A诱导抗病机理研究结果表明:TraT2A诱导处理后百合叶片中细胞早期信号分子NO和H2O2含量、抗病性物质脯氨酸含量及三种抗病相关酶PAL、PPO、POD的基因的相对表达量均显著上升,且高于其他处理。其中NO、H2O2、脯氨酸含量分别在在第1 d、第4 d和第3 d达到最大值,分别为对照2.71倍、3.41倍和7.70倍,且与其他处理组之间差异极显著;PAL和PPO基因相对表达量在第3 d时达到最大,POD基因相对表达量在第1 d时达到最大值,分别为对照11.34倍和4.47倍和5.73倍。
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