粘质沙雷氏菌脂肪酶作为一种重要的生物催化剂,已被广泛应用于催化水解、酯化等多种反应。它能高立体选择性水解拆分消旋体反式3-(4-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯(MPGM)制备(2R,3S)-(-)-3-(4-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯,即(-)-MPGM,后者是制备冠动脉血管舒张剂地尔硫卓的重要原料。本文对本研究所保藏的粘质沙雷氏菌(Seratiamarcescens)H30所产的脂肪酶进行了基因克隆、大肠杆菌重组表达、发酵优化和固定化,并利用获得的脂肪酶对手性醇进行拆分研究。利用PCR方法克隆了粘质沙雷氏菌H30的脂肪酶基因,并成功构建了pET28a-lipase、pET32a-lipase和pGEX-4T-1-lipase三种重组表达载体,用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌株进行表达,筛选出酶活力最高的重组菌株pET32a-lipase,在摇瓶中进行了脂肪酶可溶表达优化,优化后重组脂肪酶的最高酶活力为25000U/L。用凝血酶切除pET32a的N端Trx-tag后,所获得的最高酶活力为65000U/L。用乳糖代替IPTG作为诱导剂,对重组菌株表达目的蛋白进行了培养基组分和发酵条件的优化,通过单因素实验,我们确定了发酵培养基的配方和最佳诱导条件。经优化后,摇瓶发酵的脂肪酶酶活力为23000U/L,稍次于IPTG作为诱导剂时的酶产量。在7L发酵罐上进行粘质沙雷氏菌H30脂肪酶发酵的放大,获得的最高酶活为19000U/L。通过对不同载体固定化粘质沙雷氏菌脂肪酶的效果进行比较,发现环氧载体LH-EP是比较好的固定化载体。并考察了游离酶和固定化酶的水解反应最适温度、最适pH、热稳定性和pH稳定性。考察了粘质沙雷氏菌H30脂肪酶对手性醇拆分的效果,以脂肪酶拆分4-苯基-2-丁醇作为模式反应,对影响拆分反应的关键因素进行了优化,结果表明在正己烷溶剂中,45℃时,以丁酸乙烯酯类活性酯作为酰基供体,底物与酰基供体的摩尔比为1:4时,投酶量为20mg时,底物4-苯基-2-丁醇的转化率为49.5%,底物e.e值为99.4%。同时验证了该脂肪酶对地尔硫卓中间体的拆分能力也可达到目前文献报道水平。